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無細胞蛋白質合成技術を応用した植物膜輸送タンパク質の機能解析

利用无细胞蛋白质合成技术进行植物膜转运蛋白的功能分析

基本信息

批准号：
18056016
负责人：
戸澤譲
金额：
$ 3.33万
依托单位：
Ehime University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18056016/
关键词：
膜蛋白質膜輸送無細胞翻訳系リポソーム膜タンパク質

项目摘要

平成19年度には、18年度に確立した無細胞蛋白質合成技術を応用したプロテオリポソーム再構成系を用いて、ホスホエノールピルビン酸(PEP)の葉緑体内膜輸送を司るトランスポーターArabidopsis PPT1ならびにTPT(triosephosphate transporter)をコントロールとして、イネのPPT1ホモログ3種類(OsPPT1,OsPPT2,OsPPT3)の輸送基質特異性を明らかにした。イネPPT蛋白質は予想した通りPEPをリン酸対向輸送の主な基質とするトランスポーターであり、PPT1およびTPTの輸送活性が、基質特異性、比活性ともに、酵母を利用した組換え蛋白質の再構成実験より報告されている数値と同等であることを明らかにした。以上より、本課題で確立した無細胞蛋白質合成技術が膜蛋白質の機能解析に有効であることを確認した。平行して、再構成膜輸送蛋白質を精製する技術として一般的なスクロース密度勾配法に加えて、アキュデンツ(accudenz)を用いた密度勾配超遠心分離法による分画法を無細胞膜蛋白質合成系に導入した。アキュデンツ密度勾配系では、下層に分画すべきリポソームサンプル層を形成させ、超遠心分離操作中に下層から最上層ヘリポソーム画分を移動させ、可溶性タンパク質は最下層に残すことが可能となる。可溶性のGFP(green flourescent protein)が最下層に留まるのに対し、PPT1はリポソームと共に最上層へ移動していることが確認され、この系がプロテリオリポソーム分離精製法として有効であることを確認した。

In Pingcheng, in the year of 19 and 18, the production of protein in synthetic technology has been established and the system has been reconstructed. The internal membrane of the Arabidopsis PPT1 has been transmitted to the company in the form of an internal membrane (PEP), which is the most important part of the system. In this paper, the results show that the internal membrane of the company is responsible for the transmission of TPT (triosephosphate transporter), OsPPT1,OsPPT2 and so on. OsPPT3) send special information to you. PPT protein is intended to be sent to the host through PEP protein, PPT1, TPT, bioactivity, gene specificity, specific activity, and yeast use. The protein is then reorganized into a report. The number of data is the same as that. The above research and this project ensure that the membrane protein machine can be used to confirm the accuracy of the membrane protein synthesis technology. Paralleling and reconstituting the membrane to deliver proteins. The general density matching method for plasma membrane proteins, the density matching method for plasma membrane proteins, and the density matching method for plasma membrane protein separation (accudenz) were used to analyze the synthesis of membrane proteins. The density distribution system is divided into two parts: the density distribution system, the density distribution system and the separation operation. The soluble GFP (green flourescent protein) system is the most important part of the system, and the PPT1 system is the most important part of the system. The system is used to determine the accuracy of the system.