ネガティブストランドウイルスゲノムの複製と転写の分子機構と宿主制御因子

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試験管内のインフルエンザウイルスRNA合成系を用いて、非感染細胞核抽出液よりインフルエンザウイルスゲノム複製反応を促進する宿主因子としてIREF-1/MCMを同定した。vRNA複合体のみでは、ウイルスポリメラーゼは反応開始から伸長反応への移行ができず、全長のウイルスゲノムを複製できないが、IREF-1/MCMを添加することでウイルスポリメラーゼはProcessiveなRNA合成反応を行ない、全長のウイルスゲノムを複製することが明らかになった。さらに、ウイルスゲノム非結合性のNPを添加することによっても、試験管内ウイルスゲノム複製反応は促進されることが明らかになった。酵母内インフルエンザウイルスレプリコン系を用いて、スプライシング関連因子をコードする遺伝子群の中からインフルエンザウイルスのRNAの合成を促進する宿主因子の候補として、U1A、U2B"、TIA-1、Prp18を同定した。vRNPを酵素源とした試験管内ウイルスRNA合成系においても4つの因子にRNA合成促進活性が認められた。したがって、これらの宿主因子はvRNPの構成因子と直接相互作用し、ゲノム複製に関与していることが示された。インフルエンザウイルスRNAポリメラーゼのPAサブユニットの結晶構造を明らかにし、カルボキシ末端が折り畳まれた高度に疎水的な溝を形成し、そこに他のサブユニットであるPB1のアミノ末端が挿入されRNAポリメラーゼ複合体が形成されることが明らかとなった。これらの知見は新たなインフルエンザウイルス治療薬の開発に役立つものと考えられる。パラミクソウイルスに関しては、細胞指向性や病原性発現に重要な遺伝的変異を逆遺伝学の手法を用いて同定することが出来た。