生物回転分子モーター構成素子の回転の可視化

生物旋转分子马达组件旋转的可视化

基本信息

批准号：
19042002
负责人：
福岡創
金额：
$ 3.2万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2008
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19042002/
关键词：
分子モーターイメージングバクテリア分子計測イオン

项目摘要

本研究は細菌べん毛モーターの真の回転子を明らかにするために, モーター構成素子を1分子単位で蛍光標識することでモーター回転子の回転を可視化することを目指している. 本年度の研究において, モーターを蛍光標識するための光活性型GFP融合タンパク質の発現系および検出系の最適化を行った. さらに平成19年度の研究において発見した, 機能的なモーターにおける回転子構成タンパク質の交換現象についても研究を遂行した. この現象は当初の研究計画には含まれていない事項であるが, 本申請課題研究にて発見された全く新しい事実であり, 生体内における巨大分子複合体の構築および維持を理解する上で非常に重要な知見となり得る. そこで平成20年度の研究は, 回転子構成タンパク質の交換反応についても研究を進めた. 研究成果として以下が挙げられる.1. 光活性型GFPの蛍光を発現および検出システムの最適化2. 光褪色後蛍光回復(FRAP)による回転子構成タンパク質の交換反応の検出条件の確立3. 回転子構成タンパク質の交換頻度の解析4. べん毛モーター構成因子のGFP融合タンパク質の拡散運動の解析システムの構築5. GFP融合タンバク質の細胞膜内における拡散運動の解析

为了阐明细菌鞭毛电动机的真实转子，本研究的目的是通过将电动机组件在一个分子中标记，可视化运动转子的旋转。在今年的研究中，我们优化了光活性GFP融合蛋白的表达和检测系统，以将电动机标记为荧光标记。此外，我们还研究了我们在2007年研究中发现的功能电动机中转子组件的交换。这种现象不包括在原始研究计划中，但这是本应用程序研究中发现的一个全新的事实，对于了解生物体中大分子复合物的构建和维护可能非常重要。因此，2008年的研究还研究了转子组件的交换反应。研究结果包括：1。 Optimization of fluorescence of photoactive GFP and detection system 2. Establishment of conditions for detection of rotor constituent protein exchange reactions by fluorescent recovery after photofading (FRAP) 3. Analysis of exchange frequency of rotor constituent proteins 4. Construction of a system for analysis of the diffusion motion of GFP fusion proteins of flagella motor constituent factors 5. Analysis of diffusion motion within the cell membrane of GFP融合轰炸