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宿主と連携したEBウイルスDNA複製開始機構の解明と人工複製開始点構築への応用

阐明EB病毒DNA与宿主协同复制启动机制及其在人工复制起点构建中的应用

基本信息

批准号：
20055010
负责人：
和賀祥
金额：
$ 3.07万
依托单位：
Japan Women's University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20055010/
关键词：
EBウイルス EBNA1 DNA複製 ORC

项目摘要

EBウイルスDNAがもつ複製開始点oriPは、そこからの複製にヒト複製開始因子ORCが必要であることから、哺乳細胞DNA複製の良いモデル系となっている。oriP複製には、ウイルス由来複製因子EBNA1が必要であるが、EBNA1の役割の詳細は未だ明らかではない。これまでの解析から、精製したORC複合体がG-rich RNAに高い親和性を有することを見出している。この結果と既に報告のあるEBNA1のもつG-rich RNA結合活性とを考え合わせ、共通RNAを介したEBNA1-RNA-ORC複合体がoriPで形成する可能性が考えられた。そこで本年度は、この可能性をin vivo解析で証明するために、まずRNA結合活性を欠損したEBNA1変異体の作製を行った。EBNA1は直接RNA結合に関わると考えられるRGGモチーフを2つ有する。本解析ではこのRGGモチーフ内の重要なアミノ酸を別種に置換した変異体の作製を行った。そして、作製した変異体をヒト培養細胞で発現させたところ、いずれの変異体も野生型と同様に、発現したEBNA1は核に局在した。このことは、作製した変異EBNA1が今後のin vivo複製アッセイによるEBNA1機能解析に利用できることを示す。また、EBNA1の解析と平行して本年度は、細胞性転写因子かつ複製開始因子であるAlF-Cに着目した解析に着手した。この因子は、DNA配列特異的DNA結合タンパク質であるが、そのアミノ酸配列からRNA結合活性も有することが推測された。本年度はその組換え体AlF-Cを使った解析から、実際にRNA結合活性を有すること、さらにEBNA1と同様にG-richのRNAに結合選択性があることが分かった。今後、AlF-Cについても、共通のRNAを介したORCとの複合体形成が特定のDNA上で起こるのかを明らかにしていきたい。

The starting point of EB replication DNA replication is oriP, the replication starting factor ORC is necessary, and the lactation cell DNA replication is fine. The reasons for oriP replication are as follows: copy the factors EBNA1 is necessary, and the EBNA1 is not clear. We need to analyze and analyze the ORC complex, G-rich RNA gene, and sex. The results showed that the possibility of the formation of EBNA1 complex oriP was tested in both reports and reports, including the activity of G-rich RNA binding, the combination of RNA and the formation of EBNA1-RNA-ORC complex. This year, the possibility of the in vivo analysis shows that the combination of RNA and RNA is not good enough to improve the performance of the system. EBNA1 direct RNA combination test. RGG test results show that there are many errors in the system. In this analysis, you can use different kinds of equipment in the RGG market to make business decisions. You can see that the wild type is the same as the wild type, and that the EBNA1 is in the same place. In the future, we will be able to use the in vivo copy to verify that the EBNA1 machine will be able to use the information to display the data. In parallel with the analysis of the current year, the cellular writing factor, the replication factor, the AlF-C factor, the starting factor, and the starting factor of the current year and the beginning of the year. The combination of factor and DNA with specific DNA and the combination of acid and acid has the activity of combining with RNA. This year, the system AlF-C makes it possible to analyze the data, to combine the RNA binding activity with the G-rich RNA, and to select the appropriate information. From now on, the complex of AlF-C, common RNA and ORC will be formed on a specific DNA.