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細胞分裂軸を制御するキナーゼのスクリーニングと機能解析

控制细胞分裂轴的激酶的筛选和功能分析

基本信息

批准号：
20058017
负责人：
豊島文子
金额：
$ 3.84万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

项目摘要

HeLa細胞をフィブロネクチン等の細胞外基質上で培養すると、分裂期において紡錘体軸が細胞一細胞外基質接着面に対して平行に配置される.平静20年度に、この現象を利用して紡錘体軸制御に関わるキナーゼの網羅的スクリーニングを行った結果,5種類のキナーゼを新規の制御因子として同定した。平成21年度は、このうちのc-Ablに関して機能解析を行った。c-AblはSrcファミリーに属するチロシンキナーゼであり、細胞接着、運動、増殖等の様々な細胞機能に関与している。c-Ablの発現を2重類のsiRNAを用いて抑制したところ、紡錘体軸が顕著に傾く細胞が増加した。このとき、siRNA耐性のc-Ablを発現すると紡錘体軸は正常に戻すことからc-Ablの必要性を確認した。c-Ablの阻害剤処理でも紡錘体軸に異常が生じること、キナーゼ不能が他のc-Ablは紡錘体軸異常をレスキューしないことから、c-Ablのキナーゼ活性が必要であることが分かった。次に、これまでHeLa細胞の紡錘体軸制御に関与する因子との相関を調べた。その結果、PI3キナーゼの活性化、アクチン細胞骨格編成、Cdc42-PAK2の相互作用は、c-Ablをノックダウンしても正常であることが分かり、他の制御機構への関与が示唆された。そこで、非対称分裂において紡錘体軸を制御することが知られているLGN/NuMA複合体への影響を検討した。c-AblをノックアウトしたHeLa細胞では、LGNが細胞表層に過剰に存在し、一方NuMAの細胞表層への局剤が抑制されていた。C-Ablノックアウト細胞では、紡錘体がz-軸に沿って回転運動するが、このときLGNを同時にノックアウトするとその運動が抑制されることから、LGNの渦剰た細胞表層への局在が紡錘体の回転を引き起こし、結果的に紡錘体異常となることが示された

The extracellular motifs of HeLa cells were cultured on the extracellular bases, the mitotic cells were divided into cells, and then the extracellular bases were arranged in parallel. In the year 20, the system system is used to make use of the system system to monitor the performance results of the network, and the new regulation factors are the same as those of the system. In Pingcheng 21, we are able to parse the bank data by using the c-Abl machine. The c-Abl Src cell is capable of transmission and transmission, such as cell connection, cell connection, cell movement, colonization, and so on. C-Abl has shown that siRNA devices are used to restrain the growth rate and increase the number of cells. SiRNA tolerance test, c-Abl tolerance test shows that the health condition is normal, and the c-Abl need to be confirmed. C-Abl is harmful to the health of the hospital, but it is not possible to make sure that it is necessary to use the necessary information to make sure that it is necessary to make sure that it is necessary to treat the c-Abl system. The second and third parts of the system are related to the HeLa system and the factors are different from each other. The results of the test, the activation of PI3 markers, the compilation of cellular skeletons, the interaction of Cdc42-PAK2 cells, the distribution of normal cells, the control of other agents, and the instigation of other agents. This is not called the division of the body. The system is controlled by the LGN/NuMA complex. The c-Abl is responsible for the suppression of the HeLa cell, the LGN cell filter is present, and the NuMA cell filter is responsible for the suppression of the cell filter. In the C-Abl system, the cell response, the body response, the cell, the cell, the cell,