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神経系機能蛋白質の超微量検出と同定

神经系统功能蛋白的超痕量检测与鉴定

基本信息

批准号：
63638006
负责人：
奥山典生
金额：
$ 6.78万
依托单位：
Tokyo Metropolitan University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1988
资助国家：
日本
起止时间：
1988 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

脳神経系は、一部の外胚葉に由来した神経管が細胞分裂と分化、移動を繰り返して形成されることが知られている。この神経系の発生、分化、成熟の整然としたプロセスは、神経系に特徴的なさまざまな種類の蛋白質の発現をあらかじめ遺伝的に定められたプログラムに従って調節することで進行していると考えられる。本研究では、神経回路形成の特定の時期に限って発現するこれら蛋白質はじめ、神経系の形成と機能に密接に関連する脳内の微量蛋白を系統的に検出、定量、同定する方法の開発を行なった。このために、まず最近10年間のChemical Abstractを検索し、文献にあらわれた脳蛋白質を整理してそのデータベース化を行なった。また一方において、多量の脳組織を出発材料として、細胞質画分、細胞骨格蛋白質画分、細胞膜画分について系統的な分離精製方式による蛋白質の精製を試みた。純化できた蛋白質については「Brain Protein Bank」として保存すると同時に、あるものについては特異的な抗体の調製を行なった。調整した抗体は、免疫組織化学による当該蛋白質の脳内分布の調査に用いる一方、脳内での動態の研究に使用する目的で、高感度の酸素免疫評価法を確立した。一方、神経系以外の組織に存在する蛋白質との比較分析、および脳の成熟過程での脳内蛋白質の変動の解析により、神経系に特異的、ないしは神経系の形成過程に特異的と考えられる蛋白質あるいは遺伝子を数種類分同定し、その一部については蛋白質構造および遺伝子構造の解析を行なった。以上の研夕過程で、あらたに蛋白質の分離、同定のための2次元クロマトグラフィー、キャピラリー電気泳動法、2次元電気泳動法の高感度化、効率化を行なった。また、従来抗原との親和性が低いため高感度分析には適さないとされていたモノクローン抗体による超高感度免疫測定法の開発について検討された。

A part of the neurogenesis of the ectodermal system is known as the neurogenesis of cell division, differentiation, and migration. The development, differentiation and maturation of the nervous system are characterized by the development, differentiation and maturation of proteins. This study aims to develop a method for detecting, quantifying and identifying microproteins in a system closely related to the formation and function of the neuronal circuit. The Chemical Abstract of the last 10 years has been reviewed and the literature has been reviewed. The separation and purification of protein in a system of separation and purification of a large number of tissues, cytoplasm, cell skeleton and protein, and cell membrane were studied. Protein purification is carried out in the "Brain Protein Bank" and the preparation of specific antibodies is carried out simultaneously. To adjust antibodies, immunohistochemistry, and to establish a highly sensitive acid immunoassay for the purpose of investigating the distribution of the protein in the body and for the study of its dynamics. Comparative analysis of proteins present in tissues other than the nervous system, analysis of protein movement during maturation, identification of protein types specific to the nervous system, identification of protein structure and protein structure in some tissues. The above research process, such as protein separation, synchronization, two-dimensional electrokinetic method, two-dimensional electrokinetic method of high sensitivity, efficiency and so on. The affinity of the antigen was low and the sensitivity was high.