パン酵母の発現系を用いた病原真菌の多剤排出システムの解析と排出ポンプ阻害剤の探索

利用面包酵母表达系统分析病原真菌多药外排系统并寻找外排泵抑制剂

• 批准号: 15019122
• 负责人: 新見 昌一
• 金额: $ 2.94万
• 依托单位: National Institute of Infectious Diseases
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15019122/
• 关键词: 深在性真菌症; Candida albicans; 抗真菌薬; 薬剤耐性; 排出ポンプ; 出芽酵母

今回は以下の結果を得た。1.Saccharomyces cerevisieaeにCryptococcus neoformansのABC transporter, CneMDR1を組み込み、S.cerevisieae細胞膜に大量に発現させた。CneMDR1発現株は、アゾール4剤に交叉耐性を示し、脂溶性が高いitraconazoleに対しては特に高度耐性を示し、構造的に類似性のない薬剤もCneMdr 1pの基質となった。CneMdr 1p、Candida albicansのCdr 1p、C.glabrataのCdr 1pおよび、S.cerevisieaeのPdr5pの発現株のRhodamine 6G排出活性についてはCneMdr 1pが他の排出ポンプに比べて高かった。以上の結果から、C.neoformasのCneMdr 1pはS.cerevisieae発現系において薬剤排出ポンプとして機能し、アゾールのみならず種々の基質特異性を持つことが明らかになった。2.排出ポンプ発現アゾール耐性酵母株と、微生物培養ろ液、既知物質またはCombinatorial libraryを用いて、アゾールに対して感受性化する物質をマイクロプレート法で検索した。その結果ミルベマイシンあるいはCombinatorial library由来のオクタペプチドが、それぞれ単独では菌の増殖を阻止しないが、アゾールとの併用によってABCポンプ発現株を感受性化し、低濃度のアゾール存在下でも耐性株の発育を阻止した。ミルベマイシンは特にMFSポンプ発現株および細胞膜[H^+]ATPase (Pma1p)の活性には無効であった。以上の結果から、ABC輸送体を特異的に阻害してアゾール剤の効果を高める物質が効率に検出された。

The following results were obtained today. 1. Saccharomyces cerevisae Cryptococcus neoformans and ABC transporter, CneMDR1 group, S. cerevisae cell membrane, a large number of occurrence CneMdr1 exhibits high cross-resistance, high fat-solubility, and high structural similarity to CneMdr1. CneMdr 1p, Candida albicans Cdr 1p, C.glabrata Cdr 1p, S. cerevisae Pdr5p, Rhodamine 6G excretion activity, CneMdr 1p Cdr 1p, Rhodamine 6G excretion activity, Rhodamine The above results show that C.neoformas and CneMdr1 p are related to the matrix specificity of S. cerevisae. 2. Evacuation of yeast strains, microbial culture solutions, known substances, and combinatory libraries The results showed that the growth of resistant strains was inhibited by the combination of ABC and ABC, and the development of resistant strains was inhibited in the presence of low concentration of ABC. The activity of [H^+]ATPase (Pma1p) in cell membrane was not detected. The above results show that ABC transporters have a specific resistance and a high efficiency.

项目成果

新見昌一: "薬剤耐性遺伝子のパン酵母における発現と機能解析"日本医真菌学雑誌. 45,2(印刷中). (2004)

Shoichi Niimi：“面包酵母中耐药基因的表达和功能分析”，《日本医学真菌学杂志》45,2（出版中）。

新見昌一: "Chemosensitization of fluconazole resistance in Saccharomyces cerevisieae and pathogenic fungi by a D-octapeptide derivative"Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 48,4. 1256-1271 (2004)

Shoichi Niimi：“D-八肽衍生物对酿酒酵母和病原真菌的氟康唑耐药性的化学增敏”，抗菌剂和化疗，1256-1271。