Muse 細胞の微小環境の解明とストレス付加による増幅培養法の検討

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組織から分離できるMuse細胞は、骨髄穿刺や生検皮膚により患者から容易に採取できる再生医療用の幹細胞ソースとして注目されており、このMuse細胞はストレス環境下で組織細胞から単離できる事が報告されている。しかしながら、この細胞がもつ特有のストレス耐性メカニズムや大量培養法については未だ確立されていない。本研究では、多分化能を維持したMuse細胞の大量培養条件の基礎検討とストレス耐性メカニズムの解明を目的とした。Muse細胞は、骨髄由来間葉系幹細胞（MSC）や皮膚由来線維芽細胞（NHDF）に含まれている。これらの細胞に対してストレスシグナル（高水素イオン濃度培地の環境）が効率的にインプットされる浮遊培養環境を与え、Muse細胞の増殖と表面マーカーを解析した。未分化マーカーであるSSEA-3抗体を用いてMuse細胞数を定量した。その結果、MSCを用いた場合、浮遊培養５日でMuse細胞の割合は８倍に増加し、Muse細胞のコロニーフォーメーションも誘導できた。このコロニーをさらに７日培養を続けてもMuse細胞の割合は増加しなかった。一方、コロニーを単一細胞にして培養を継続した場合、Muse細胞は初期濃度の１０倍程度まで増加し、高効率で培養することに成功した。この手法をNHDFに対しても応用した結果、７日間の浮遊培養でMuse細胞を３０倍に増殖させることができた。この事から、高水素イオン濃度培地と浮遊培養環境を組み合わせることで、Muse細胞の大量培養系を確立できる可能性が見いだせた。Muse細胞の多分化能維持に関わるE-cadherin遺伝子の解析は達成できなかったが、コロニーフォーメーションを誘導しやすい浮遊培養系でMuse細胞の増殖能が向上したことから、細胞間接着因子が多分可能維持や増殖と深く関連していることが考えられる。