間葉系幹細胞のメモリーB細胞、長寿命型抗体産生細胞に対する制御効果の解析

间充质干细胞对记忆B细胞和长寿抗体产生细胞的调节作用分析

• 批准号: 15K19891
• 负责人: 石田 潤
• 金额: $ 2.25万
• 依托单位: Kobe University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2015
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2015-04-01 至 2016-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15K19891/
• 关键词: 間葉系幹細胞; 抗体関連拒絶反応; 多分化能

(1) マウス由来間葉系幹細胞の単離とその細胞学的特徴の解析論文などで公開されている、骨髄細胞(BMCs)から接着細胞のみを培養継代し間葉系幹細胞(MSCs)を分離する手法では安定したMSCsを採取することは困難であった。我々は、フローサイトメトリーを用いC57BL/6マウスのBMCsからPI(-)CD45(-)Ter119(-) gated Sca-1(+)PDGFR-α(+)細胞をsortingし、この細胞群だけを培養継代することにより比較的均一なMSCsが分離されることを明らかにした。抗体を用いた表面マーカーの解析ではc-kit, Sca-1, CD34, CD45, CD11b, H-2Kb, I-Ab, CD86がいずれも陰性、CD29, CD44が陽性であることを確認した。分化誘導実験では、この細胞群が骨細胞、脂肪細胞、軟骨細胞いずれにも分化することを確認した。リンパ球混合試験では、リンパ球単独培養群と比較し、MSCs混合培養群では有意にリンパ球の増殖が抑制されることを確認した。これらの結果は文献で報告されているMSCsの細胞学的特徴と一致していた。ついで、上記手法により分離培養されたMSCsが、in vitroで成熟B 細胞の末梢分化ならびに機能を抑制するかを追試した (Asari et al. Exp Hematol 2009)。Transwell system を用いてC57BL/6マウス由来成熟B 細胞をLipopolysaccharide 刺激下でMSCs と供培養し、B細胞単独培養群と比較した場合、供培養群で有意にB 細胞の形質細胞分化ならびにIgM抗体産生が抑制されることを示した。

(1)It is difficult to isolate mesenchymal stem cells (MSCs) from bone marrow cells (BMCs) by culture and isolation of MSCs. C57BL/6 BMCs were isolated from PI(-) CD45 (-)Ter119(-) gated Sca-1(+)PDGFR-α(+) cells by sorting, culturing and reproducing these cell populations. The antibody was analyzed with c-kit, Sca-1, CD34, CD45, CD11b, H-2Kb, I-Ab, CD86, CD29, CD44, CD29, CD24, CD29, CD Differentiation induction was confirmed among osteocytes, adipocytes and chondrocytes. Comparison of MSCs mixed culture population and intentional inhibition of proliferation of MSCs in mixed culture population The results are consistent with those reported in the literature. The methods described above were used to isolate and culture MSCs and inhibit the differentiation and function of mature B cells in vitro (Asari et al. Exp Hematol 2009). Transwell system is used to inhibit the differentiation of B cells and IgM antibody production in vitro.