根尖性歯周炎による骨欠損部再生に向けた間葉系幹細胞の未分化維持機構の解明

阐明间充质干细胞对根尖周炎骨缺损再生的未分化维持机制

基本信息

批准号：
15K21131
负责人：
松下健太
金额：
$ 2.58万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2015
资助国家：
日本
起止时间：
2015-04-01 至 2016-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15K21131/
关键词：
未分化間葉系幹細胞

项目摘要

本研究は骨髄細胞中に存在する未分化間葉系幹細胞に対してLeukemia Inhibitory Factor (LIF) を作用させると未分化状態を維持するかを調べることを目的とした。マウスの大腿骨と脛骨から採取した骨髄細胞を培養し浮遊細胞を除去し得られた付着細胞に対してLIFを作用させて、フローサイトメータを用いて幹細胞マーカーであるCD106、CD166、CD29、CD105 (SH)、CD73 (SH3/4)、CD44、CD90 (Thy-1)、CD71およびStro-1の発現について解析したところ、CD29、CD105 (SH)、CD71の発現上昇が認められた。この結果から、LIFは骨髄細胞中に存在する未分化間葉系幹細胞を未分化状態に維持している可能性が示唆された。次に、骨髄細胞から得られた未分化間葉系幹細胞を含む付着細胞にLIFを作用させたのち、細胞からmRNAを回収し、逆転写酵素を用いてcDNAを合成した。このcDNAを用いてリアルタイムPCRを行い、幹細胞マーカーであるCD106、CD166、CD29、CD105 (SH)、CD73 (SH3/4)、CD44、CD90 (Thy-1)、CD71およびStro-1の発現量の変化について解析したところ、CD29、CD105 (SH)、CD71の発現上昇が認められた。このことから、フローサイトメータを用いた実験結果ではタンパクレベルで幹細胞マーカーの発現上昇を確認でき、リアルタイムPCRを用いた実験結果からは遺伝子レベルでの幹細胞マーカーの発現上昇が示唆された。このことからLIFは骨髄細胞に存在する未分化間葉系幹細胞の未分化維持機構に強く関与していることがわかった。

这项研究旨在研究骨髓细胞中存在的未分化间充质干细胞上激活白血病抑制因子（LIF）是否保持未分化状态。从股骨中收集的骨髓细胞，并培养小鼠的胫骨以去除悬浮细胞，并将LIF应用于所得的附着细胞上。当使用流式细胞仪分析干细胞标记的表达CD106，CD166，CD29，SH），CD73（SH3/4），CD44，CD90（THY-1），CD71和Stro-1的表达时，使用流式细胞仪进行分析，并增加了CD29，CD105（SH）和CD71的表达。这些结果表明，LIF可以维持在未分化状态下骨髓细胞中存在的未分化的间充质干细胞。接下来，将LIF应用于含有从骨髓细胞获得的未分化间充质干细胞的连接细胞，并使用逆转录酶合成了从细胞中收集mRNA并从细胞中收集mRNA。使用此cDNA进行实时PCR，并对干细胞标记物CD106，CD166，CD29，CD29，CD105（SH），CD73（SH3/4），CD44，CD44，CD90（THY-1），CD71和CD71和Stro-1和Stro-1，以及CD29，CD29，CD29，CD105（SH）和CD7的表达进行分析进行了分析。这表明使用流式细胞仪的实验结果表明，蛋白质水平上干细胞标记的表达增加，使用实时PCR的实验结果表明，基因水平上干细胞标记的表达增加。这表明LIF与骨髓细胞中存在未分化的间充质干细胞的未分化的维持机理强烈涉及。