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転写因子HES1を制御する小分子化合物の探索と応用

调控转录因子HES1的小分子化合物的寻找及应用

基本信息

批准号：
16K16642
负责人：
竹野谷美穂子
金额：
$ 2.41万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2016
资助国家：
日本
起止时间：
2016-04-01 至 2017-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

小分子によって、細胞分化の分岐点にかかわるタンパク質間相互作用の抑制を試みた。まず目的のタンパク質間相互作用を検出できる蛍光偏光を用いたスクリーニング系を構築した。相互作用に特に重要なトリプトファン(W)-アルギニン(R)-プロリン(P)-トリプトファン(W)ペプチドを含むペプチドを合成した。さらにこのぺプチドに蛍光基(FAM)を付加し蛍光ペプチドが完成した。このペプチドと相互作用するタンパク質TLE1のC末端部分のWDドメイン(TLE1WD)を昆虫細胞でヒスチジンタグを付加して発現させた。このタグを利用し、ニッケルカラムによってTLE1WDを精製した。この精製したTLE1WDと合成した蛍光ペプチドの相互作用を蛍光偏光を用いて観察し、タンパク質の濃度依存的に蛍光偏光が強くなることが観察された。さらに蛍光基のないペプチドで競合試験も行い、蛍光ペプチドとペプチドの競合がみられた。以上のように、スクリーニング系の構築が完了した。この蛍光基のないペプチドをポジティブコントロールとして、2939個の小分子を用いてスクリーニングを行なった。その内2つのヒット化合物を得た。この化合物の構造活性相関を行い官能基の必須な位置が分かった。さらにどのように活性を上げられるかを考えるため、TLE1WDと化合物との共結晶構造解析を試みた。共結晶化に取り組んだが、まだ結晶は得られていない。細胞内での化合物活性を評価するための系の構築を試みた。しかしトランスフェクションした目的のタンパク質ではなく、内在性のタンパク質の存在が評価に影響していることが考えられ、さらなる改良が必要となった。細胞分化を制御する出発点となる化合物の取得に成功した。さらなる構造活性相関研究により創薬への応用が期待できる結果が得られた。

Small molecules are involved in the inhibition of cytoplasmic interactions at the point of differentiation. The purpose of this paper is to construct a system of optical polarization and mass-to-mass interaction The interaction is particularly important for the selection (W)-selection (R)-selection (P)-selection (W)-selection. This is the first time I've ever seen a woman's face. This selection and interaction between the protein and the WD terminal region of the C-terminal portion of TLE1 (TLE 1WD) was discovered through the enhancement of cell growth in insect cells. This is the first time I've seen a TLE1WD. This is the first time that we've seen the light polarization of light. In addition, the selection of candidates for the first round of the competition will be conducted in the middle of the competition, and the selection of candidates for the second round will be conducted in the middle of the competition. The construction of the above system has been completed. The light base of the film is very small, and the film is very small. 2. The compound is obtained in two ways. The structural activity of these compounds is related to the necessary position of the functional group. The structure of the compound was analyzed. Co-crystallization is the process of crystallization. Evaluation of the activity of compounds in cells and the construction of systems The quality of purpose is not enough, and the existence of immanence is affected by the evaluation. This makes it necessary to improve. The success of the compound in inhibiting cell differentiation The results of the structural activity correlation study are expected.