Identification and functional analysis of cancer-related microRNA in esophagus cancer

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食道癌は集学的治療が行われているにもかかわらず、高頻度に再発もしくは遠隔転移を起こす予後不良な疾患である。食道癌の新しい治療法及び診断法を開発するためには、詳細なメカニズムを理解することが重要である。我々の教室ではこれまでに食道癌におけるmicroRNA(miRNA)の発現解析を報告してきた。しかしながら、いまだ解析の進んでいないmiRNAは多数ある。これらを踏まえ、下記の研究を行った。１)食道癌臨床検体におけるmiRNA発現解析。我々の教室ですでに論文発表されている食道癌臨床検体30例における73種類のmiRNA発現プロファイルから候補miRNA(miR-23a、miR-26a、miR-27b、miR-96、miR-128b、miR-129)を同定した。症例数を増やすため臨床検体のcDNAを90例作成し、候補miRNAの発現状況をRT-PCRで再度評価した。miR-96に関しては、発現上昇に伴い生存期間の有意な短縮を認めた。２）miRNAの発現抑制実験。食道癌細胞株TEシリーズ及びKYSEシリーズのmiR-96の発現状況をRT-PCRで評価した。最も発現の多く見られたKYSE70にmiR-96のinhibitorを導入し発現抑制を、最も発現の少なかったTE-8にmiR-96のmimicを導入して発現促進を行った。RT-PCRで発現抑制もしくは発現促進がなされていることを確認した。miR-96の発現抑制もしくは発現亢進が細胞増殖に与える影響をギムザ染色及びWST-1により評価した。現在のところ細胞増殖には有意な差が見られていない。３）miR-96の発現抑制もしくは発現亢進が癌細胞の浸潤能及び遊走能に与える影響をcell invasion assayや癌細胞の細胞遊走assayなどで評価した。また、オンラインソフトにて同定されたmiR-96のターゲット遺伝子の機能解析も行った。