Epigenetic analysis of iPS cell and blood sample in moyamoya disease for novel biomarker

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【方法】表現不一致一卵性双生児1組2名、成人もやもや病患者9名からなる一般患者群と、8名からなる健常対照群の血漿サンプルを用いて、マイクロアレイによるmiRNA網羅的発現解析を行った。凍結血漿200 microLから抽出したRNAは、脱リン酸化反応、ラベル化反応の後、2588種のmiRNAを検出可能なマイクロアレイチップ を用いてハイブリダイゼーションを行った後、シグナルデータを取り込んだ。続いて主成分解析を実施し、血漿miRNA発現のプロファイルを確認した。さらに患者群で共通変動するmiRNAを抽出し、そのうちqPCRによる定量解析を行うものを選択した。さらに別cohortの患者3名と健常者3名の単核球から樹立したiPSECsにおけるmiRNAの発現解析も行った。細胞内total RNAを抽出し、定量解析を行った。続いて発現変動を認めたmiRNAの予測標的遺伝子およびiPSECsのトランスクリプトームデータからpathway解析を行った。【結果】主成分解析では、miRNA発現プロファイルにより患者群と健常群が2つのクラスターに分離されることが示された。2つのcohortで共通変動する23種のmiRNAが同定され、そのうち定量解析ではmiR-6722-3p、miR-328、miR-150-5pの患者群/健常群発現比が有意な発現増加を認め、マイクロアレイ解析の結果とも矛盾しなかった。また、これら3種のmiRNAはiPSECsにおいても、同様の発現傾向を示した。さらに、これらのmiRNAの予測標的遺伝子による制御方向と発現方向が一致した296 iPSECs遺伝子のpathway解析では、PTENシグナル系を筆頭とし、細胞増殖、細胞生存、細胞接着などにかかわる経路が示された。