動脈硬化の発症に寄与する内膜アポトーシスの検討

检查导致动脉硬化发展的内膜细胞凋亡

• 批准号: 17K19943
• 负责人: 藤本 典宏
• 金额: $ 3.99万
• 依托单位: National Defense Medical College
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Challenging Research (Exploratory)
• 财政年份: 2017
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2017-06-30 至 2022-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17K19943/
• 关键词: Galecctin-7; HMGCS1; コレステロール; galecctin-7; 培養細胞; Galectin-7; コレステロール定量; 免疫染色; RT-PCR; Western-blotting; アポトーシス; 動脈硬化

THP-1細胞やヒト単球由来Ｍ１マクロファージ、血管内皮を使用したin vitro での実験、GFP 融合galectin-7 蛋白を強発現させるベクター(pCMV/myc/cyto/galectin-7/GFP)のトランスフェクションや継代に困難を極めている状態。そこで、galectin-7 と結合するタンパク質としてHMG-CoA Synthase1（HMGCS1）を同定、galectin-7 とHMGCS1は相互に発現を亢進させ、さらにgalectin-7とHMGCS1が結合することによりコレステロール合成亢進が進み、皮膚の黄色腫形成に至ることを論文とし、誌上（Journal of investigative dermatology）に掲載することを進めた。論文投稿してみたところ、査読者から、これら2つのタンパク質の結合がコレステロール合成促進に繋がることの証明を求められた。それに従い、ヒト培養表皮細胞（HaCaT細胞）に合成リコンビナントgalectin-7タンパクを添加することによりコレステロール合成が亢進する系に、galectin-7 との結合を担うHMGCS1ペプチド(18AA~32AA)を添加して、そのコレステロール合成に対する抑制効果を検討した。その際、コントロールとして27 番目のアミノ酸残基フェニルアラニンをセリンに変異させ、galectin-7と結合不能にさせた、変異合成 HMGCS1 ペプチド（18AA~32AA,GIVALEIYSPSQYVD）を用いた。すると、変異ペプチドでは見られなかった抑制効果が野生型のHMGCS1ペプチドでは見られたため、この結果を追加して再投稿したところ accept された。

THP-1 cell culture is derived from M1 cell culture, vascular endothelial cells are used in vitro, GFP fusion galectin-7 protein is strongly expressed in vitro, and the expression of the protein (pCMV/myc/cyto/galectin-7/GFP) is extremely difficult in vitro. Galectin-7 binds to HMG-CoA Synthase1 (HMGCS1), galectin-7 binds to HMGCS1, and galectin-7 binds to HMGCS1. Galectin-7 binds to HMGCS1, and galectin-7 binds to HMGCS1. Paper submission: The synthesis of galectin-7 in cultured epidermal cells (HaCaT cells) was enhanced by the addition of galectin-7 and the binding of galectin-7 to HMGCS1 (18AA ~32AA). In addition, galectin-7 can be used to synthesize HMGCS1 protein (18AA~ 32 AA, GIVALEYSPSQYVD). HMGCS1 is a wild-type HMGCS1, and the results are added.