权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

Analysis of calcium dynamics using novel calcium indicator protein with calpain sensitive sequence

使用具有钙蛋白酶敏感序列的新型钙指示蛋白分析钙动力学

基本信息

批准号：
19790165
负责人：
TAKATSUKA Kenji
金额：
$ 2.38万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2008
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では、研究代表者が作製した新規細胞内カルシウム指示蛋白質(F2C)について、(1)これまで困難であったカルシウム指示蛋白質の動物個体への応用、すなわちトランスジェニックマウスの作出を行い、(2)トランスジェニックマウスの臓器を用いて細胞内カルシウムの動態を観察した。全身でF2Cを発現するように作製したトランスジェニックマウスでは、ゲノムにF2Cが組み込まれたマウス9系統うち7系統で遺伝していた。この7系統のマウスをLacZ染色による発現部位解析をしたところ、脳・網膜・膵臓・甲状腺・脳脈絡叢・腎臓などで発現していることが確認された。さらに「精子でCreリコンビナーゼを発現するマウス」と掛け合わせることによって、各臓器でF2Cが正常に発現することを確認できた。上記の臓器のうち、脳脈絡叢の細胞がカルシウムホメオスタシスに重要な機能を担っているため、臓器におけるカルシウム動態を観察するために脳脈絡叢を摘出しカルシウム動態を計測した。カルシウム流入を引き起こす刺激として4αPDD(TRPV4 のアゴニスト)を与えたところ、溶媒のみでは応答が無く、4αPDD刺激時には応答が認められた。このことよりF2C発現マウスを用いることで、臓器によるカルシウム動態の蛍光観察が可能となり、蛍光指示薬を取り込ませる必要なくカルシウムライブイメージングができるようになった。

In this study, the study representatives worked to develop a new intracellular indicator protein (F2C),(1) to investigate the use of the indicator protein in individual animals,(2) to investigate the dynamics of the intracellular indicator protein in individual animals. The whole body F2C is displayed in the system. The 7 systems were identified by LacZ staining. "Sperm" is not detected."Each organ is F2C." In addition, the important functions of the choroid plexus cells in the organ and choroid plexus are monitored and their dynamics are measured. 4αPDD(TRPV4) is the response to 4αPDD stimulation, and the response to 4αPDD stimulation is the response to 4αPDD. The F2C displays its function in the form of a light monitor, a light indicator, and a necessary light monitor.