化石および現生イノシシ属の分子生物学的手法による同定と系統分類

使用分子生物学方法对化石和现代野猪进行鉴定和系统发育分类

• 批准号: 08740408
• 负责人: 大島 光春
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Kanagawa Prefectural Museum of Cultural History
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08740408/
• 关键词: 化石タンパク質; 化石コラーゲン

用意した動物の骨は現生が,ニホンイノシシ(Sus scrofa leucomystax),リュウキュウイノシシ(S.s.riukiuanus),ニホンカモシカ(Capricornis crispus),ニホンジカ(Cervus nippon nippon)。化石が沖縄島産イノシシ(S.scrofa),シカ(Cervus nippon)である。これらの試料各2gをPBS+PI→GuHCI+PI→sup.sample A,ppt.→GuHCI+EDTA+PI→sup.sample Bで順に処理し,各試料について脱灰前に溶出させたsample Aと,脱灰後に溶出させたsample Bを得た。さらにこれらをゲル濾過カラムを用いて脱塩後,タンパク量を測定した。結果は全ての試料にタンパク質が含まれていたが,化石試料には少なかった。試料を5ngずつに分け凍結乾燥して以降の試料とした。次に,化石試料に含まれるタンパク質がバクテリア由来のものでないことを確かめるためと,他の試料にどのようなタンパク質が含まれているかを大まかに判断するために,SDS-PAGEにかけて銀染色とCBB染色を行った。その結果全ての資料のCCB染色でcollagenα1とcollagenα2と思われるバンドが見られた。銀染色ではcollagenα1とcollagenα2に相当する位置が抜けていた。collagen以外のタンパクは検出されるが特定はできなかった。同じ動物の骨のsample Aとsample Bの違いは認められなかった。本年度予定していたELISAによる同定は,化石の沖縄島産シカ(Cervus nippon)だけについて行うことができた。結果は,抗シカ抗体に交差してシカだと確認された。これで方法についてめどが立ったので,今後は今年度作製した試料についていろいろな抗体をあてて,データを蓄積する。

With the intention of animal bone reappearance,(Sus scrofa leucomystax),(S.s. riukianus),(Capricornis crisis),(Cervus nippon nippon) Fossil Sample A,ppt.→GuHCI+PI→ sup.sample B were treated in sequence, sample A was dissolved before ashing, sample B was dissolved after ashing. The amount of water in the water is measured after the water is removed from the water. The results show that the quality of the whole sample is different from that of the fossil sample. Samples are frozen and dried to reduce the sample temperature. Second, the fossil sample contains the same substance as the original sample, and the other sample contains the same substance as the original sample. SDS-PAGE shows that silver staining and CBB staining are performed. The results of CCB staining were as follows: Collagenα1 and Collagenα2. Colagen α1 and Colagen α2 are located in the same position as the silver stain. A collection of items outside of the collection. Sample A and sample B of the same animal's bones are not recognized. This year's estimate is that the fossil will be produced on the island of Okinawa (Cervus nippon). The results showed that the antibody against the virus was positive and negative. This method is very effective, and in the future, it will be used to prepare samples for this year.