毛状根特異的高発現プロモーターを利用した物質生産系の開発

利用毛状根特异性高表达启动子开发物质生产系统

• 批准号: 08877317
• 负责人: 黒柳 正典
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: University of Shizuoka
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 1997
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08877317/
• 关键词: ヒヨス毛状根; 高発現プロモータ; HR7cDNA遺伝子; HR7ゲノム遺伝子; 毛状根; プロモーター; 物質生産; 高発現遺伝子

高い増殖性の毛状根で高発現の遺伝子に興味が持たれ、そのプロモーターは導入遺伝子の毛状根での発現応用において興味が持たれる。そこで、ヒヨス毛状根(毛根病菌15834株で誘導)で高発現な遺伝子のクローニングとそのプロモーターの解析を行った。ヒヨス毛状根からcDNAライブラリーを作成し、プラークハイブリダイゼーション、ドットプロットハイブリダイゼーションを行い、毛状根で特異的に高発現のcDNAクローン7つを単離した。これらの塩基配列の決定とホモロジー検索の結果2つのクローンは各々熱ショック蛋白、パーオキシダーゼと相同性が確認された。7つのクローンの内、最も高発現な、HR7と仮称するcDNAは0.5kbと、比較的小さな遺伝子であり、しかも正常根や葉では全く発現しておらず毛状根に特異的な遺伝子であることが明らかになった。HR7のゲノミッククローンをスクリーニングするためにヒヨス毛状根のゲノミックライブラリーを作成し、HR7のcDNAをプローブとしてスクリーニングを行い、ポジティブクローンを得た。この5'上流域を含む塩基配列を決定し、転写開始点も決定した。5'上流域にGUSを繋いで作成したプラスミッドをパーティクルガンにより毛状根、正常根、葉に導入しGUS活性を測定した結果、この5'上流域が毛状根特異的発現プロモーター部分であることを確認した。CaMV35Sプロモーターと比較した結果、発現プロモータ部分であることを確認した。CaMV35Sプロモータを凌駕するものではなかった。HR7遺伝子はオーキシンで特異的に発現が抑制されるという興味有る結果が得られた。

The highly proliferative hairy roots are of great interest in the high-expression of genes, and the common mushroom is of great interest in the expression of genes introduced into the hairy roots. Hairy roots (15834 strains of Rhizopus pilosus) are highly developed and analyzed. Hairy roots contain cDNA fragments that are highly expressed in the genome, and hairy roots are highly expressed in the genome. The identity of the two groups was confirmed by the results of the analysis. 7. The most highly expressed cDNA in the inner part of the root, HR7. The cDNA of the root is 0.5kb, and the small and normal roots and leaves of the root are completely expressed. The specific cDNA of the hairy root is expressed in the open. HR7's DNA is generated from hairy roots, and HR7's DNA is generated from hairy roots. The 5'upper basin contains the base column and the writing start point. 5'upper watershed GUS activity measurement results were obtained by making a selection of hairy roots, normal roots, and leaves, and the 5' upper watershed GUS activity measurement results were confirmed by making a selection of hairy root-specific GUS activity. CaMV35S is the result of comparison, and the result of discovery is confirmed. CaMV35S is the best choice. HR7 is the first time that a child has been exposed to a special phenomenon.