コンタクトインヒビションに関与する細胞表面タンパク質の精製とクローニング

参与接触抑制的细胞表面蛋白的纯化和克隆

• 批准号: 08878128
• 负责人: 柳沢 健
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: Jichi Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 1997
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08878128/
• 关键词: コンタクトインヒビション; リポソーム; サンクリン依存性キナーゼインヒビッター; 接触阻害; サイクリン依存性キナーゼインヒビッター

マウス線維芽細胞BALB/c-3T3を接触阻害がかかるようにコンフルエントになるまで培養し、超遠心により細胞膜画分を得た。それをオクチルグルコシドで可溶化し、HPLCを用いてMono Qカラムにアプライし、グラディエントエリューションで溶出した。そこで得られた各フラクションを透析し、プロテオリポソームを形成させ、対数増殖期のBALB/c-3T3細胞の培養液に添加し、細胞増殖に対する影響を検討すると、細胞増殖を促進するフラクションと阻害するフラクションがあることが判明した。しかし、それ以上の、コンタクトインヒビションを惹起するタンパク質の精製は、大量の材料を必要とすることもあり、困難が予想された。そこで、より高感度なアッセイ法を開発することを念頭におき、コンタクトインヒビションにおける細胞周期制御機構の検討を試みた。具体的には、コンタクトインヒビションに関与するとされるp27Kip1をはじめとする、サイクリン依存性キナーゼインヒビッター(CKI),p15,p16,p21,p26のmRNAの発現をノーザンブロッティング法で検討し、BALB/c-3T3細胞において、細胞密度の増加にともない、p15,p16,p27の発現量が上昇することと、p21のmRNAは予想に反して、急激に減少することを見い出した。これらのタンパク質の量も、同様に相反する変化を示し、また、このとき、サイクリン依存性キナーゼ(Cdk)のうちのCdk2の活性が急激に減少し、retinoblastoma(Rb)タンパク質の脱リン酸化が亢進していることも明らかになった。したがって、コンタクトインヒビションにおいて、細胞膜上における細胞同士の相互作用は、なんらかのシグナルを経由して、上記のCKlの相反する発現調節を誘導し、細胞増殖の阻害に寄与しているものと予想された。

The BALB/c-3T3 of the buds, the contact damage, the contact damage, the cell membrane painting. The solution is soluble, the HPLC is soluble, the Mono Q is soluble, and the solution is not soluble. In order to improve the quality of dialysis, the formation of BALB/c-3T3 cells, the addition of culture medium during reproductive period, the growth of cells, the promotion of colonization, the prevention of infection, the formation of bacteria, the addition of culture medium during reproductive period, the growth of cells, the promotion of colonization, the prevention of infection, the formation of bacteria, the formation of cells, the addition of culture medium, the growth of cells, the promotion of colonization, the prevention of damage, the prevention of infection, and so on. I don't know, I don't want to know. The method of monitoring, high-sensitivity and high-sensitivity is used to control the cell cycle of the control agency. The details are as follows: p27Kip1, BALB/c-3T3, cell density, cell density, cell density and cell density P27, p21, mRNA, p27, p21, p21, p27, p21, p21, p21, In the opposite direction, there is an indication of dependence (Cdk), Cdk2 activity, acute irritation (less), retinoblastoma (Rb), deacidification, acidification, acid activation, and so on. The cells in the cell membrane interact with each other, the cells in the cell membrane interact with each other, the cells in the cell membrane interact with each other, the cells in the cell membrane interact with each other, the cells in the cell membrane interact with each other, the cells in the cell membrane interact with each other, the cells in the cell membrane interact with each other, the cells in the cell membrane interact with each other, the cells in the cell membrane interact with each other, and the cells in the cell are blocked by CKl.