小脳層構造形成を調節する因子としての一酸化窒素の機能解明

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1.発生中の小脳の各層において一酸化窒素の合成酵素(NOS)が発現し機能していることを、NOSの酵素活性、ウエスタンブロッティングによるNOSタンパク質の同定さらにRT-PCRによるNOSmRNAの確認でおこなった。さらに生後3日目から12日目までラット新生児にNitroarginine(NOSの特異的阻害剤)を投与することによって、小脳外顆粒層からの顆粒神経芽細胞の分裂・分化・移動に異常が生じる事を見いだした。2.NOSによる発生制御機構を詳細に検討するためにin vitroのOrganotypic culture系を確立することを試みた。いくつかの条件を検討した結果、生後9日目のラット小脳を500μmの切片で培養することでin vivoにほぼ相当する発生過程をin vitroで行わせることが可能となった。またNOSの阻害剤を培養液中に加える事によって、in vivoと同じく小脳の層形成が停止することを見いだした。現在、顆粒神経芽細胞の成長に関与すると考えられているInsulin-like growth factorおよびそのReceptorにどのような影響が及んでいるかをRT-PCRおよびIn situ hybridizationを用いて解析を進めている。