小脳層構造形成を調節する因子としての一酸化窒素の機能解明

阐明一氧化氮作为调节小脑层结构形成因素的功能

• 批准号: 08878148
• 负责人: 中山 孝
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Yokohama City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 1997
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08878148/
• 关键词: 小脳; 発生; 一酸化窒素; Organotypic culture; NO; 一酸化窒素合成酵素; 形態形成

1.発生中の小脳の各層において一酸化窒素の合成酵素(NOS)が発現し機能していることを、NOSの酵素活性、ウエスタンブロッティングによるNOSタンパク質の同定さらにRT-PCRによるNOSmRNAの確認でおこなった。さらに生後3日目から12日目までラット新生児にNitroarginine(NOSの特異的阻害剤)を投与することによって、小脳外顆粒層からの顆粒神経芽細胞の分裂・分化・移動に異常が生じる事を見いだした。2.NOSによる発生制御機構を詳細に検討するためにin vitroのOrganotypic culture系を確立することを試みた。いくつかの条件を検討した結果、生後9日目のラット小脳を500μmの切片で培養することでin vivoにほぼ相当する発生過程をin vitroで行わせることが可能となった。またNOSの阻害剤を培養液中に加える事によって、in vivoと同じく小脳の層形成が停止することを見いだした。現在、顆粒神経芽細胞の成長に関与すると考えられているInsulin-like growth factorおよびそのReceptorにどのような影響が及んでいるかをRT-PCRおよびIn situ hybridizationを用いて解析を進めている。

1. NOS activity, NOS quality and NOS RNA identification in all layers of the development process. From the 3rd day to the 12th day after birth, Nitroarginine(NOS specific inhibitor) was injected into the newborn and abnormal differentiation, differentiation and migration of granular neurons in the outer granular layer were observed. 2. A detailed discussion of the organic culture system in vitro The conditions for development were discussed, and the results were obtained by culturing small sections of 500μm on the 9th day after birth. The development process was similar to that in vitro. In vivo, the formation of small layers in the medium containing NOS inhibitors stops. Now, the growth of granulosa cells is related to the study of Insulin-like growth factor and Receptor, and the analysis of RT-PCR and In situ hybridization.

项目成果

Tadahisa Momoki: "Expression of glucose transporter isaforms GLUT1 and GLUT3 in developing rat cerebellum" Neurochem.Res.22. 868 (1997)

Tadahisa Momoki：“葡萄糖转运蛋白异构体 GLUT1 和 GLUT3 在发育中的大鼠小脑中的表达”Neurochem.Res.22。

Nobuo Inoue: "Expression of nitric oxide synthase during development of cultured rat cerebellar granule cells." Neurochem.Res.22. 890 (1997)

Nobuo Inoue：“培养的大鼠小脑颗粒细胞发育过程中一氧化氮合酶的表达。”

Kazuhiko Yamaguchi: "Enhancement of neurite-sprouting by suppression of HPC-1/syntaxin 1A activity in cultured vertebrate nerve cells" Brain Res.740. 185-192 (1996)

Kazuhiko Yamaguchi：“通过抑制培养的脊椎动物神经细胞中的 HPC-1/突触蛋白 1A 活性来增强神经突萌芽”Brain Res.740。

Takahiko Kato: "Expression of nitric oxide synthase in developing and differentiating rat cerebellum" Neurochem.Res.22. 850 (1997)

Takahiko Kato：“一氧化氮合酶在大鼠小脑发育和分化中的表达”Neurochem.Res.22。

Sonoko Furuya: "A monoclonal antibody to astrocytes,subepithelial fibroblasts of small intestinal villi and interstitial cells of the myenteric plexus layer" Anat.Embrol.195. 113-126 (1997)

Sonoko Furuya：“针对星形胶质细胞、小肠绒毛上皮下成纤维细胞和肌间神经丛层间质细胞的单克隆抗体”Anat.Embrol.195。