β5インテグリン分子の多様性の病的意義

β5整合素分子多样性的病理意义

• 批准号: 09877044
• 负责人: 河原 栄
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Kanazawa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09877044/
• 关键词: インテグリン; 変異

前年度の研究より、一般人の10%に存在することが明らかになった変異型(FNK欠損)のβ5インテグリン機能を知るために、αvを発現しているがβ5を発現しないCHO-K1細胞への変異型cDNAの遺伝子導入の準備を開始始した。まず、発現ベクターに組み込まれた通常型β5インテグリンcDNA(β5pcDNA1/Neo)は米国、Scripps研究所のCheresh博士から分与された。変異型β5インテグリンcDNAについては、変異型5'末端に近い9bp欠損部分の短い領域をPCR法を用いて増幅し、制限酵素を用いて変異型の同部分と置き換える方法をとった。適切な制限酵素部位は欠損部より5'側に一カ所(BspHI)あったが、欠損部の3'側にはなかったので、3'側の切断はベクターのクローニングサイト(Xbal)を利用した。変異型9bp欠損部は、通常型β5と変異型β5のヘテロ接合体であるKATO-III細胞のcDNAのPCR産物からTAクローニング法でサブクローニングした。しかしながら、通常型はベクター内に正方向または逆方向にそれぞれ同じ確立(6/12)で挿入されたにも関わらず、変異型は常に逆方向に挿入された(0/11)。従って、逆方向の挿入片の目的部分をBspHIとBamHIで切り出し、BamHI切断部を平滑末端とし、さらにXbaIを有するリンカーを付加した。同様に正常型β5cDNAを有するβ5pcDNA1/Neoから変異部に相当する部分をBspHIとXbaI同じ制限酵素を用いて除去し、変異末端フラグメントを挿入した。この後にCHO-K1細胞に正常型または変異型のβ5cDNAを遺伝子導入する予定である。

According to the previous year's research, 10% of the general population exists and 10% of the general population does not exist.ために、αvを発appears しているがβ5を発appears CHO-K1 cells and prepares for the introduction of heterotypic cDNA into CHO-K1 cells. The normal type β5 インテグリンcDNA (β5pcDNA1/Neo) was distributed by Dr. Cheresh of the Scripps Research Institute in the United States. Allotype β5 インテグリンcDNA については, 5' end of the allotype 5' is short and the 9bp missing part is short. The domain PCR method is used to increase the amplitude, and the restriction enzyme method is used to replace the same parts of the heterotype. Appropriate restriction of the enzyme site, the 5' side of the missing part, the 3' side of the missing part (BspHI), and the 3' side of the missing partにはなかったので、3' side cutting はベクターのクローニングサイト(Xbal)をutilizationした. Special type 9bp defective part, normal type β5 and special type β5 のヘテロ joint body KATO-I The PCR product of cDNA in II cells is a TAKNA method.しかしながら, normal type はベクター内にforward direction または reverse direction にそれぞれ同じestablished (6/ 12) でINSERT されたにもGUAN わらず, 変 abnormal は often に in the opposite direction にINSERT された (0/11).従って, the purpose part of the reverse direction insertion piece is をBspHI and BamHI is cut out, the BamHI cutting part is smooth end, and the さらにXbaIをhas a するリンカーをpay plus した. Same as the normal type β5cDNA, there is a β5pcDNA1/Neo type, and the different parts are equivalent.をBspHI and XbaI are the same as restriction enzymes and are removed by いて, and the iso-terminal フラグメントを is inserted into it. It is scheduled to be introduced into CHO-K1 cells with normal type and abnormal type β5cDNA.