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重篤な術後合併症の対策に関する若干の実験的研究:-白血球接着による血管内皮細胞活性化の制御について-

针对严重术后并发症的一些实验研究： - 通过白细胞粘附控制血管内皮细胞活化 -

基本信息

批准号：
09877232
负责人：
池田忠明
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Showa University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

项目摘要

[目的]免疫炎症部位における白血球と血管内皮細胞は接着することによってお互いに活性化され、2細胞系のそれぞれのシグナル伝達によってさらなる炎症反応を誘導するとされている。白血球は血管内皮細胞と接着することにより活性化され、血管内皮細胞は白血球との接着により細胞内Ca2+濃度([Ca2+]i)の上昇を引き起こす。ずり応力などの「流れ」に関連する力は、潅流液中のATPの濃度に応じた[Ca2+]iの上昇を誘導する。そこで個々の細胞の[Ca2+]i変化を画像化できる蛍光顕微鏡装置を用いて、エンドトキシンで刺激したヒト臍帯静脈血管内皮細胞上に好中球を流し、好中球との相互作用による血管内皮細胞内Ca2+シグナル伝達に「流れ」がどのように作用するか検討した。[方法]血管内皮細胞はヒト臍帯静脈よりコラーゲナーゼを用いて採取し、ヘパリンと内皮細胞増殖因子を添加した10%血清入りRPMI1640で培養、実験には第2〜5継代のconfluent cultureを使用した。白血球はヒト末梢血をクエン酸採血し、デキストランによる赤血球沈降後、Ficoll-Hypaqueでリンパ球、単球を除き、残った赤血球を低圧溶血して得た好中球を用いた。Ca2+測定用のガラスプレート上に内皮細胞をconfluentに培養し、lipopolysaccharide(LPS)(1μg/ml)で4時間刺激した後、Ca2+測定用蛍光色素のFura-2を取り込ませ、ハンクス液(HBSS)で満たしたflow chamberにそのガラスプレートを置いて好中球を流し、蛍光顕微鏡下に内皮細胞内の[Ca2+]i変化を10秒間隔で60回(10分間)測定した。[結果及び考察]LPS刺激なしの内皮細胞では有意な[Ca2+]iの変化は認められず、LPS刺激下の内皮細胞では[Ca2+]i濃度の有意な上昇が見られた。LPS刺激下でも「流れ」のない状態および、「流れ」があっても好中球の存在がない状態では、内皮細胞内に有意な[Ca2+]iの変化は認めらなかった。これらのことから、「流れ」は好中球の多数存在する血流に曝され、エンドトキシンで活性化された血管内皮細胞のCa2+シグナル伝達を誘導し、炎症反応の始動または促進に寄与していることが示唆された。[結論]本研究によって明かにされた好中球を介した活性化血管内皮細胞の[Ca2+]i上昇における「流れ」の重要さから、「流れ」は、好中球が多数存在する血流に曝され、エンドトキシンで活性化された内皮細胞におけるCa2+シグナル伝達を誘導することにより、炎症反応の始動あるいは促進に関与していることが示唆された。

[Objective] Leukocytes and vascular endothelial cells in immune inflammatory sites are activated and activated in two cell lines, and inflammatory responses are induced in two cell lines. The activation of leukocytes and endothelial cells leads to an increase in intracellular Ca2 + concentration (Ca2 +). The increase of ATP concentration in the fluid is induced by the increase of ATP concentration in the fluid. [Ca2 +]i changes in umbilical vein endothelial cells were imaged using a light microscope device to stimulate the flow of Ca2 + in endothelial cells and the interaction between Ca2 + and Ca2 + in endothelial cells. [Methods] Vascular endothelial cells were cultured in vitro at RPMI1640 and cultured in confluent culture at passage 2 ~ 5. White blood cells are collected from the peripheral blood, and after sedimentation, Ficoll-Hypaque is used to remove white blood cells from the peripheral blood, and residual red blood cells are used to remove white blood cells from the peripheral blood. Endothelial cells were cultured in confluent medium on a flow chamber for Ca2 + measurement, and then stimulated with lipopolysaccharide(LPS)(1μg/ml) for 4 hours. Fura-2, a fluorescent pigment for Ca2 + measurement, was extracted. HBSS was used to determine the [Ca2 +]i change in endothelial cells at 10-second intervals for 60 cycles (10 minutes). [Results] Endothelial cells stimulated by LPS showed an intentional change in [Ca2+]i and an intentional increase in [Ca2+]i concentration. Under LPS stimulation, the state of "flow" and the existence of "flow" in the endothelial cells are intentionally changed. From this point on,"flow" is caused by the presence of blood flow in most of the globe, which induces Ca2 + intracellular transport in activated vascular endothelial cells, and promotes the initiation of inflammatory reactions. [Conclusion] This study shows that the [Ca2 +]i increase in activated vascular endothelial cells mediated by good mitochondria is important for blood flow exposure, and the [Ca2 +]i increase in activated vascular endothelial cells mediated by good mitochondria is important for the initiation of inflammatory reaction.