次世代のDDS開発を志向したエクソソームターゲティングシステムの効率的探索

有效寻找旨在开发下一代 DDS 的外泌体靶向系统

• 批准号: 22KJ0645
• 负责人: 國武 厚貴
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2023
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2023-03-08 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22KJ0645/
• 关键词: 細胞外小胞; エクソソーム; Small EV; DDS; CRISPR screen

バーコード化small EVライブラリーを用い，特定のマーカータンパク質を発現するsmall EVのサブポピュレーションの放出に特異的にかかわる遺伝子のスクリーニングを行った．スクリーニング結果を用いたパスウェイ解析により，CD63を発現するsmall EVとCD9を発現するsmall EVでは，細胞内での生合成過程が異なっていることを強く示すデータを得た．とくにCD63発現small EVの放出はリソソーム機能やミトコンドリア機能に強い影響を受けることが判明した．この知見を利用し，リソソームやミトコンドリアの機能阻害を起こす小分子を利用することでCD9発現small EVの放出量を大きくは変えないままにCD63発現small EVの放出量を増減させることが可能であることを発見した．これまでのスクリーニング技術ではこのようなsmall EVのサブポピュレーションごとに網羅的遺伝子スクリーニングを行うことは困難であり，本発見は開発したsmall EVのバーコード化技術とそれを用いたスクリーニング技術の有用性を強く示す結果であるといえる．生体内では様々な種類の細胞が様々な 機能をもったsmall EVを放出しており，恒常性の維持や逆に病態の進展に寄与していることがわかっている．本技術の活用によってこのようなsmall EVごとの機能，生合成過程の理解が進めばこれまで未解明であった疾患の理解，さらには治療法の開発へとつながることが期待できる．

条形码的小型EV库用于筛选特别涉及表达特定标记蛋白的小型电动汽车的亚群的基因。使用筛选结果的途径分析产生了数据，这些数据强烈证明细胞内的生物合成过程在表达CD63和表达CD9的小EV之间有所不同。发现表达CD63的小型电动汽车的释放尤其受溶酶体和线粒体功能的影响。利用这一发现，我们发现，通过利用抑制溶酶体和线粒体功能的小分子，可以增加或减少表达CD9的小型电动汽车的释放，而不会显着改变表达CD9的小型EV的释放。借助以前的筛查技术，对于小型电动汽车的每个亚群，都很难进行全面的遗传筛查，并且可以说这一发现是强烈表明条形码技术对小型电动汽车对开发的小型电动汽车的有用性和使用它们的筛查技术的结果。已经发现，在体内，各种类型的细胞释放具有各种功能的小电动汽车，有助于维持体内平衡，而相反，可以促进病理状况的发展。通过使用这项技术，如果我们可以提高对小型电动汽车的功能和生物合成过程的理解，则可以预料，这将导致人们对迄今为止尚未理解的疾病的理解，并开发治疗方法。

项目成果

RNAバーコードを用いた細胞外小胞放出制御因子の網羅的探索

使用 RNA 条形码全面搜索细胞外囊泡释放调节剂

• 发表时间: 2022
• 作者: 〇國武厚貴，小嶋良輔，水野忠快;浦野泰照
• 通讯作者: 浦野泰照

CRISPR-gRNAの利用による細胞外小胞放出制御因子の網羅的/サブポピュレーション特異的探索

使用 CRISPR-gRNA 全面/亚群特异性搜索细胞外囊泡释放调节因子

• 发表时间: 2022
• 作者: 國武 厚貴