Development of FRET system for screening of PAD-specific inhibitors from periodontopathogenic bacteria.

开发用于从牙周病原菌中筛选 PAD 特异性抑制剂的 FRET 系统。

• 批准号: 22KJ2324
• 负责人: 熊谷 友樹
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2023
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2023-03-08 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22KJ2324/
• 关键词: PPAD; Porphylomonas gingivalis; periodontal disease; Rheumatoid arthritis; citrullination; RAW264.7 cells; macrophage

歯周病原細菌であるPhorphylomonas gingivalis（P. g）が関節リウマチ（RA）の発症に関与する可能性が報告されているが、分子生物学的な根拠は不十分である。RAの発症の原因の一つとして宿主由来のシトルリン化酵素（PAD）が考えられているが、P. gは口腔内細菌で唯一PAD （PPAD）を産生することが報告された。しかしながら、PPADが宿主タンパクをシトルリン化し、抗CCP抗体を誘導することを証明した報告は、未だない。我々は、P. gのRA発症への分子生物学的な因果関係を明らかにすることを研究目的とした。実験にはRAW264.7マクロファージ様細胞（RAW細胞）を用い、P. gはW83株を全菌体もしくは外膜小胞を分離して細胞障害性を確認し使用した。PPADに特異的な配列のペプチドを合成し、PPAD阻害剤の候補としてPPADに対するモノクローナル抗体を作製した。作製した抗PPAD抗体を用いてその親和性と特異性を検討した。作製した抗体は歯周病原細菌のうち、P. gの全菌体または外膜小胞を特異的に認識することが確認された。P. gを感染させたRAW細胞とその培養上清を用いてビメンチンのシトルリン化の検出を検討した結果、培養上清のシトルリン化を確認した。また同様に検出されたビメンチンがシトルリン化されていると想定した。PPADの機能をさらに明らかにするためにPPAD欠損株を用いて増殖能・炎症性サイトカインの産生・貪食能についても検討した。PPADの欠損によりP. g自体の増殖能が向上したが、感染させたRAW細胞の増殖能には影響を与えなかった。P. gで刺激したRAW細胞の培養上清を用いてTNF-αの産生を調べた結果、P. g菌の全菌体よりも外膜小胞による刺激の方がRAW細胞のTNF-α産生を誘導したが、PPADの欠損や抗体による中和はそれに影響を与えなかった。

Pathogenic bacteria around the tooth Phomorphomonas gingivalis (P. g) are reported to be related to the development of joint disease (RA), and molecular biology is not very important. A review of the causes of RA is presented in this paper. The origin of PAD is discussed in detail below. PPAD is a host of anti-CCP antibodies. The purpose of this study is to clarify the causal relationship between RA and P. g. RAW264.7 cells were isolated from P. gW83 cells and their cell toxicity was confirmed. PAD-specific alignment of candidates for synthesis, PAD-inhibitor candidates for PAD-specific antibody production Anti-PPAD antibodies are produced with high affinity and specificity. Antibodies were used to identify the whole cell size of peripheral pathogenic bacteria, P. g., and outer membrane vesicles. P.g. infected RAW cell culture supernatant was used to examine the results and culture supernatant was confirmed. In the same way, we want to make sure that we have the right answers. The function of PPAD is to promote the growth of PPAD deficient plants, to produce inflammatory cells, and to detect gluttony. PPAD P. The proliferation of RAW cells can be affected by infection. P.g. Stimulation of RAW Cell Culture Supernatants with TNF-α Production and Effects of P.g. Whole Cell Outer Membrane Cells Stimulation of RAW Cell TNF-α Production and PPAD Deficiency and Antibody Neutralization

项目成果

Mechanosensitive Piezo1 dysregulates macrophage’s innate immune responses to Porphyromunas gingivalis.

机械敏感性 Piezo1 失调巨噬细胞对牙龈卟啉单胞菌的先天免疫反应。

• 发表时间: 2023
• 作者: Tomoki Kumagai;Satoru Shind;Shin Nakamura;Alireza Heidari;Alexander Bontempo;Maria Rita Pastore;Alexandra Chirino;Elizabeth Leon;Hideki Shiba;Mark Cayabyab;and Toshihisa Kawai
• 通讯作者: and Toshihisa Kawai

Extracellular Release of Citrullinated Vimentin Directly Acts on Osteoclasts to Promote Bone Resorption in a Mouse Model of Periodontitis.

• DOI: 10.3390/cells12081109
• 发表时间: 2023-04-08
• 期刊: Cells
• 影响因子: 6