Development of FRET system for screening of PAD-specific inhibitors from periodontopathogenic bacteria.

开发用于从牙周病原菌中筛选 PAD 特异性抑制剂的 FRET 系统。

基本信息

批准号：
22KJ2324
负责人：
熊谷友樹
金额：
$ 1.09万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2023
资助国家：
日本
起止时间：
2023-03-08 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22KJ2324/
关键词：
PPAD Porphylomonas gingivalis periodontal disease Rheumatoid arthritis citrullination RAW264.7 cells macrophage

项目摘要

歯周病原細菌であるPhorphylomonas gingivalis（P. g）が関節リウマチ（RA）の発症に関与する可能性が報告されているが、分子生物学的な根拠は不十分である。RAの発症の原因の一つとして宿主由来のシトルリン化酵素（PAD）が考えられているが、P. gは口腔内細菌で唯一PAD （PPAD）を産生することが報告された。しかしながら、PPADが宿主タンパクをシトルリン化し、抗CCP抗体を誘導することを証明した報告は、未だない。我々は、P. gのRA発症への分子生物学的な因果関係を明らかにすることを研究目的とした。実験にはRAW264.7マクロファージ様細胞（RAW細胞）を用い、P. gはW83株を全菌体もしくは外膜小胞を分離して細胞障害性を確認し使用した。PPADに特異的な配列のペプチドを合成し、PPAD阻害剤の候補としてPPADに対するモノクローナル抗体を作製した。作製した抗PPAD抗体を用いてその親和性と特異性を検討した。作製した抗体は歯周病原細菌のうち、P. gの全菌体または外膜小胞を特異的に認識することが確認された。P. gを感染させたRAW細胞とその培養上清を用いてビメンチンのシトルリン化の検出を検討した結果、培養上清のシトルリン化を確認した。また同様に検出されたビメンチンがシトルリン化されていると想定した。PPADの機能をさらに明らかにするためにPPAD欠損株を用いて増殖能・炎症性サイトカインの産生・貪食能についても検討した。PPADの欠損によりP. g自体の増殖能が向上したが、感染させたRAW細胞の増殖能には影響を与えなかった。P. gで刺激したRAW細胞の培養上清を用いてTNF-αの産生を調べた結果、P. g菌の全菌体よりも外膜小胞による刺激の方がRAW細胞のTNF-α産生を誘導したが、PPADの欠損や抗体による中和はそれに影響を与えなかった。

尽管据报道，牙周致病性细菌，苯甲雀（P. g）可能参与类风湿关节炎（RA）的发展，但分子生物学不足。宿主衍生的瓜氨酸酶（垫）被认为是RA发育的原因之一，但据报道，P。G是唯一产生垫垫（PPADS）的口服细菌。但是，尚未证明PPAD可以表明瓜氨酸宿主蛋白并诱导抗CCP抗体。我们旨在阐明与P. g ra发展的分子生物因果关系。在实验中，使用了RAW264.7巨噬细胞样细胞（RAW细胞），并从全细胞或外膜外部囊泡中分离出P. G使用的W83菌株以证实细胞毒性。合成具有特异性PPAD的序列的肽，并将针对PPAD的单克隆抗体作为PPAD抑制剂的候选者。研究了制备的抗PPAD抗体的亲和力和特异性。已经证实，产生的抗体特别识别牙周病原细菌中的P. g或外膜外囊泡的所有细胞。研究了使用P. g感染的RAW细胞及其培养上清液检测波形蛋白的检测，并确认了培养上清液的柠檬酸化。还假定检测到的波形蛋白是瓜氨酸形成的。为了进一步阐明PPAD的功能，我们还研究了使用PPAD缺陷菌株的增殖能力，炎症细胞因子的产生和吞噬能力。 PPAD的缺乏提高了P. G本身的增殖能力，但并不影响感染原细胞的增殖能力。使用P. g刺激的RAW细胞的培养上清液研究了TNF-α的产生。外膜囊泡刺激在生细胞中诱导的TNF-α产生，而不是P. g的整个细胞。但是，PPAD缺乏症或抗体中和没有影响。

项目成果

期刊论文数量（3）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Mechanosensitive Piezo1 dysregulates macrophage’s innate immune responses to Porphyromunas gingivalis.

机械敏感性 Piezo1 失调巨噬细胞对牙龈卟啉单胞菌的先天免疫反应。

DOI：
发表时间：
2023
期刊：
影响因子：
0
作者：
Tomoki Kumagai;Satoru Shind;Shin Nakamura;Alireza Heidari;Alexander Bontempo;Maria Rita Pastore;Alexandra Chirino;Elizabeth Leon;Hideki Shiba;Mark Cayabyab;and Toshihisa Kawai
通讯作者：
and Toshihisa Kawai

Extracellular Release of Citrullinated Vimentin Directly Acts on Osteoclasts to Promote Bone Resorption in a Mouse Model of Periodontitis.