老人斑アミロイド蛋白質の免疫生化学的研究

老年斑淀粉样蛋白的免疫生化研究

• 批准号: 60217013
• 负责人: 篠田 友孝
• 金额: $ 0.96万
• 依托单位: Tokyo Metropolitan University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Special Project Research
• 财政年份: 1985
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1985 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-60217013/
• 关键词: アルツハイマー病; 老人斑蛋白; アミロイド蛋白; 老年痴呆; HPLC; 不溶性蛋白

アルツハイマー病(AD)脳よりこの病変に関連すると思われる不溶性蛋白質の分離精製、ならびに生化学的検策を試みた。1.不溶性蛋白の可溶化条件の検討(1)90%ギ酸抽出脳より生理食塩水、コラゲナーゼ処理、1%SDS処理により可溶画分を完全に除去した試料を、90%ギ酸中で4℃24時間保ち、その後15000rpmで可溶画分を分離した。この処理で約15%が可溶化された。不溶性画分はさらにCNBnで酸化解裂を行い可溶化を試みた。この処理では約60%が可溶化された。それぞれの画分の蛋白成分を、SDS-disc電気泳動で分析したところ、前者からは高分子成分以外に約5Kの成分が得られ、また後者からは、高分子成分以外に70K,55K,30K,20K成分が得られた。(2)エチレンジアミン水酸化第二銅抽出6%エチレンジアミン水酸化第二銅(EDCU),pH13.5溶液で、不溶画分を4時間処理し、沈心上清を蒸留水に透析したのち凍結乾燥した。SDS-disc電気泳動で検策したところ、高分子成分子成分の他に、70-40K領域および5K成分が認められた。抽出効率は良好であった。2.可溶画分の精製およびアミノ酸分析(1)TSK3000SWによる高速液体クロマトグラフィー(HPLC)ギ酸およびEDCU可溶画分を8M尿素溶液中でHPLCを行ったところ、電気泳動パターンと類似の画分が得られた。(2)H3013による逆相HPLC(1)で分画されたそれぞれの画分をさらに高度に精製するため、HPLCを利用した。ギ酸可溶画分からは7種類の、またEDCUPK【II】からは4種の成分が得られた。アミノ酸分析の結果いづれの画分も、酸性アミノ酸およびグリシン、バリン、ロイシン含量が高かった。

The separation and purification of insoluble proteins and biochemical methods were studied. 1. The solubilization conditions of insoluble protein were discussed as follows: (1)90% acetic acid extraction, physiological water treatment, 1% SDS treatment, complete removal of soluble protein, 90% acetic acid at 4℃ for 24 hours, and separation of soluble protein at 15000rpm. This treatment is about 15% soluble. Insoluble components are dissolved in CNBn. This treatment is about 60% soluble. SDS-disc electrokinetic analysis was performed on the protein components except for the polymer components at about 5K. SDS-disc electrokinetic analysis was performed on the protein components except for the polymer components at 70K,55K,30K and 20K. (2)Water Acidification Second Copper Extraction 6% Water Acidification Second Copper (EDCU), pH 13.5 Solution, insoluble fraction, 4 time treatment, precipitation, distilled water dialysis, freeze drying. SDS-disc electrokinetic analysis, polymer molecular composition, 70-40K domain and 5K composition The rate of extraction is good. 2. Soluble fractions were refined and analyzed by acid (1)TSK3000SW, high speed liquid chromatography (HPLC), and EDCU. Soluble fractions were analyzed by HPLC in 8M urea solution. (2)H3013 was purified by reverse-phase HPLC(1). There are 7 kinds of soluble components in acid, EDCUPK [II] and 4 kinds of soluble components in acid. The results of acid analysis showed that the content of acid, acid and phosphorus was high.

项目成果

FEBS Lett. 185. (1985)

FEBS 快报。

Biochem Biophys R.C.126. (1985)

生物化学生物物理 R.C.126。

Lancet. 1. (1985)

柳叶刀。

Molec.Immunol. 22. (1985)

分子免疫。

Biochem Biophys R.C.126-3. (1985)

生物化学生物物理 R.C.126-3。