単純ヘルペスウイルスのDNA複製に関与する蛋白質の同定及びその機能について

单纯疱疹病毒DNA复制相关蛋白的鉴定及其功能

• 批准号: 61570227
• 负责人: 西山 幸広
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1986
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1986 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-61570227/
• 关键词: 単純ヘルペスウイルス; DNA複製; トポイソメラーゼ; DNAポリメラーゼ; 3´→5´エキソヌクレアーゼ; 阻害剤

トポイソメラーゼ【II】(Topo【II】)の阻害剤として知られるVP-16-213を用い、単純ヘルペスウイルス(HSV)DNA合成にTopo【II】の関与があるかどうかを検討した。HSV2型DNA合成は10ug/mlのVP-16により80%以上抑制され、その阻害曲線は細胞DNA合成のそれと類似していた。HSV.DNA合成がほとんど完全に抑制される薬剤存在下でも、ウイルスの初期蛋白質合成に阻害は認められなかった。また、VP-16で感染細胞を処理すると、新生ウイルスDNA錠に切断が生ずることがわかった。試験管内でのTopo【II】反応系にVP-16を加えると二重鎖切断を起こすことが確認された。以上の結果は、HSVDNA複製にTopo【II】が関与していることを強く示唆している。しかし、感染後のTopo【II】活性には変化が認められないこと、VP-16に抵抗性のウイルスが分離されないことなどから、HSVDNA複製に作用しているのは細胞由来の酵素である可能性が強い。HSV DNA複製に中心的な役割を果しているウイルスDNAポリメラーゼについては、付随する3´→5´エキソヌクレアーゼの機能について検討し、また一次構造の決定を行なった。3´末端を放射標識したdA4000/dT46〔【^3H】〕dT1とdA4000/dT46〔【^3H】〉dC1を基質として用いHSV DNAポリメラーゼの至適条件下で反応を行なわせると、mismatched pairを形成している3´末端の〔【^3H】〉dCが急速に除去された。また、HSV ONAポリメラーゼは、大腸菌のpolIに比べ有意に高い3´→5´エキソヌクレアーゼ/ポリメラーゼ活性比をもっていることが明らかになった。HSV DNAポリメラーゼは、1240個のアミノ酸から構成され、1型とのbsuologyは91%であった。アフィジュリン抵抗性株の変異部位、1型及びEBV DNAポリメラーゼの一次構造との比較などから、活性中心の形成に重要な領域はC末側の1/2に含まれていることが推定された。

[II] (Topo [II]) block the information that VP-16-213 is used, and that the (HSV) DNA synthesizes Topos [II] and Topos. HSV2 DNA synthesizes 10ug/ mlads VP-16. More than 80% of the suppression and blocking curves of HSV2 DNA are similar to those of HSV2. The synthesis of HSV.DNA was completely inhibited by the presence of protein in the early stage of synthesis. The infected cells of VP-16 and VP-16 were divided into two groups: newborn, newborn, DNA, cut off, treat, treat. In the tube, the counter-effect is VP-16 plus double cut-off. Please confirm the error. The above results, HSVDNA copy Topo [II] request and response response strongly indicate that you are instigating an error. After infection, the activity of VP-16, the activity of Topo2, the activity of Topo1, the activity of Topo2, the activity of Topo. after infection, the activity of Topo. In the HSV DNA replication Center, you will be able to make a decision on the operation of the computer, the operation of the DNA copy center, the operation of the server, the operation of the machine, the operation of the machine, and the operation of the computer. 3 'end-to-end radiology dA4000/dT46 ([^ 3H]) DT1

项目成果

Tsurumi,T.: Gene. (1987)

鹤见，T.：基因。