in situ hybridzation法によるB型肝炎ウイルス増殖動態の解析

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in situ bybridization法を用いてB型慢性肝疾患患者の肝組織内HBV DNAの存在様式を検討した。材料はPBS buffered 4% paraform aldehydeで固定した生検および剖検肝組織のパラフィンブロックを用いた。photobiotinacetate(BRESA社)で標識した組み換えHBV DNAをprobeとし、DAB,peroxidaseを用いたavidin-biotin-complex法によってprobeを検出した。probeの検出感度は0.1pg DNAと良好であった。HBe抗原陽性慢性肝疾患ではHBV DNA陽性肝細胞が集魂をなして存在し、細胞質および核内にHBV DNA陽性顆粒を密に認めたのに比し、HBe抗体陽性慢性肝疾患ではHBV DNA陽性肝細胞,HBV DNA陽性顆粒とも著明に減少していた。HBV DNAとHBc抗原の検出感度はほぼ同等であった。また、一部の肝細胞癌においてHBV RNA(mRNA)が検出された。本法は日常入午し得るホルマリン固定パラフィン包埋組織を用いて、組織切片上で特異的遺伝子を検出するとともに個々の細胞内で特定の遺伝子が発現されているのを検出する事が可能であった。