辺縁性歯周炎の組織化学的研究-モノクローナル法によるプロスタグランジン抗体の作製とその局在性-

边缘性牙周炎的组织化学研究-单克隆方法制备前列腺素抗体及其定位-

• 批准号: 61570873
• 负责人: 和唐 雅博
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Osaka Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1986
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1986 至 1987
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-61570873/
• 关键词: プロスタグランジン; モノクローナル法; 歯周疾患

プロスタグランジン(PG)E_2と牛血清アルブミン(BSA)を水溶性カルボジイミドを縮合剤として作製した抗原(BSA1モルに対しPG数モル結合したもの)を, Balb/Cマウスの腹腔に免疫し, PGE_2モノクローナル抗体の作製を行っている. 細胞融合は, 感作された脾細胞とミエローマ細胞をポリエチレングリュールを用いて行い, ハイブリドーマを作製している. スクリーニングは, 96ウェルプレートを用いELISA法で行った. すなわち, 抗原の合成と同様にして作製したPGE_2とポリリジンの縮合物を作製し, それを抗原として使用し, 培養上清と反応, つづいて酵素標識の2次抗体と反応させ, ABTSによ発色を行い, 吸光光度計にて陽性ウェルの測定を行っている. そして, 陽性ウェルのコロニーを大量培養し, Radioimmuno assayにてその特異性, 力価を検索したが, 特異性の高い, 高力価の抗体が得られていない. 現在, 免疫組織学的染色に適する抗体を得る為, 免疫方法(免疫回数, 抗原量, 免疫間隔), 使用するミエローマ細胞の種類スクリーニングの方法, およびクローニングの方法などにつき検討を行っている.

PGE_2 and Bovine Serum Albumin (BSA) are water-soluble and can be used to prepare condensed antigen (BSA1). PGE_2 can be used to prepare anti-PGE_2 antibody. Cell fusion is the process of cell fusion. The ELISA method was used to detect the protein content of the protein. Antigen synthesis and syntheses, preparation of PGE_2 and polycondensates, use of antigens, culture supernatant and reaction, secondary antibody reaction to enzyme identification, ABTS staining, and detection of positive antibodies by spectrophotometer. In addition, the positive cells were cultured in large quantities, and the Radioimmuno assay was characterized by high specificity, high potency, and high specificity antibodies. Now, immunohistological staining is suitable for antibody generation, immunization methods (number of immune cycles, amount of antigen, immune interval), cell type selection methods, selection methods, and selection methods.

项目成果

和唐雅博,筒井正弘,魚部健市: 歯科医学.

Masahiro Wato、Masahiro Tsutsui、Kenichi Uobe：牙科。