特異なペプチド鎖延長因子EF-3の関与する酵母延長反応機構の生化学的研究

酵母Saccharomyces carLsbergensisより精製した各種の延長因子とリボソームで構成するin vitroペプチド鎖延長反応系を用いて、各素過程に対するEF-3/ATP系の効果を解析した。1.EF-3/ATP水解系はポリU依存のポリフエニルアラニン合成反応には必須である。ポリU依存のEF-1αによる同族のplie-tRNAの結合には数倍の促進効果を示すのに、ポリU、ポリA、ポリCをメッセンジャーとするLeu-tRNAの誤読結合や、誤読促進剤パロモマイシンによるLeu-tRNAやPhe-tRNAの結合反応はEF-3/ATP系によって全く促進されなかった。EF-1α・GTPのみの存在下に結合するPhe-tRNAと、更にEF-3/ATPを加えて得られる結合体の差異を検索したところ、Phe-tRNAに結合するリボソームタンパクの差を明らかにするに致っていないが、低【Mg^(++)】環境下に曝したとき、後者は分解を始めるのに前者は全く安定であるという結合状態の明瞭な差異が解った。この結合状態の差異によって次のステップ、ペプチド結合形成即ちポリフエニルアラニン合成が可能か否かの差として現われることが明らかになった。2.N-Acetylphe-pur形成反応でみて、ペプチド結合形成反応段階にはEF-3ATP系は全く促進効果を示さなかったが、EF-2依存の転座反応は解媒量EF-2存在下に促進効果を迅めた。3,酵母EF-3に対する抗体はテトラヒメナやアルテミアからのリボソームタンパクと交錯反応する2本のバンドを与えた。この抗体はリボソームATPase活性を阻害した。4.EF-3/ATPによる促進はGMPPNP存在下にも起りEF-1αのリボソーム結合下にphe-tRNAの結合状態の変化を促していると云える。5.テトラヒメナのリボソーム系ではATPによるポリペプチド合成の促進効果が認められない。

酵母Saccharomyces carLsbergensisより精製した各種の延長因子とリボソームで構成するin vitroペプチド鎖延長反応系を用いて、各素過程に対するEF-3/ATP系の効果を解析した。1.EF-3/ATP水解系はポリU依存のポリフエニルアラニン合成反応には必須である。ポリU依存のEF-1αによる同族のplie-tRNAの結合には数倍の促進効果を示すのに、ポリU、ポリA、ポリCをメッセンジャーとするLeu-tRNAの誤読結合や、誤読促進剤パロモマイシンによるLeu-tRNAやPhe-tRNAの結合反応はEF-3/ATP系によって全く促進されなかった。EF-1α・GTPのみの存在下に結合するPhe-tRNAと、更にEF-3/ATPを加えて得られる結合体の差異を検索したところ、Phe-tRNAに結合するリボソームタンパクの差を明らかにするに致っていないが、低【Mg^(++)】環境下に曝したとき、後者は分解を始めるのに前者は全く安定であるという結合状態の明瞭な差異が解った。この結合状態の差異によって次のステップ、ペプチド結合形成即ちポリフエニルアラニン合成が可能か否かの差として現われることが明らかになった。2.N-Acetylphe-pur形成反応でみて、ペプチド結合形成反応段階にはEF-3ATP系は全く促進効果を示さなかったが、EF-2依存の転座反応は解媒量EF-2存在下に促進効果を迅めた。3,酵母EF-3に対する抗体はテトラヒメナやアルテミアからのリボソームタンパクと交錯反応する2本のバンドを与えた。この抗体はリボソームATPase活性を阻害した。4.EF-3/ATPによる促進はGMPPNP存在下にも起りEF-1αのリボソーム結合下にphe-tRNAの結合状態の変化を促していると云える。5.テトラヒメナのリボソーム系ではATPによるポリペプチド合成の促進効果が認められない。