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脳特異蛋白質の分子特性と動態に関する研究

脑特异性蛋白质的分子特性和动力学研究

基本信息

批准号：
61580148
负责人：
礒辺俊明
金额：
$ 0.83万
依托单位：
Tokyo Metropolitan University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1986
资助国家：
日本
起止时间：
1986 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

脳神経系に局在する蛋白質の系統的な検索と分離同定、およびその動態に関して研究を行ない以下の成果を得た。1.脳抽出液の2次元電気泳動で検出された400種類の主要蛋白質についてスポット番号、等電点、分子量、脳内含量を整理した「蛋白質索引」を作製した。以上をマイクロコンピュータに登録し、各項目ごとの索引を可能として、脳内蛋白質検索のためのデータベースの基礎を作った。2.脳内蛋白質を系統的に分離精製する目的で、コンピュータ制御2次元液体クロマトグラフィーシステムを開発、試作した。ウシ大脳および小脳から調製した蛋白質抽出液を直接このシステムに導入し、全自動分析により200〜250の蛋白質を分離、分取した。分離した主ピークについては2次元電気泳動マップ上での位置を同定し、蛋白質索引との対応づけを行なった。一方主要蛋白質20種類について特異抗体を調製し、酵素免疫化学法により組織分布を検討した。同時に一部のアミノ酸配列を決定して一次構造データベースを検索し、S-100、神経特異エノラーゼ、脳型クレアチンキナーゼなど、一連の既知脳特異蛋白質を同定した。3.分離精製した脳内特異蛋白質(bX-27:30、または14-3-3蛋白質)についてモノクローン抗体を作製し、免疫組織化学的局在(神経細胞)を明らかにした。また微量定量法を確立して脳の部位別分布についての知見を得た。諸種の生化学的性質、不均一性について調査し、この蛋白質が蛋白質キナーゼ【II】によるチロシン水酸化酵素およびトリプトファン水酸化酵素の活性化に不可欠な「活性化因子」であることを明らかにした。その分子機構を開明する目的でcDNA法による一次構造決定に着手した。またその過程を円滑化するため、蛋白質の新しいC末端アミノ酸配列決定法を考案した。

The following results have been awarded by the Department of Health in the determination of the separation of the protein system and the study of the dynamic system. 1. The two-dimensional extraction solution was used to determine the serial number, isoelectric point, molecular weight and content of the major proteins, such as those of the most important proteins, such as those of the most important proteins, such as the number, isoelectric point, molecular weight and content, and the protein index was used as an indicator. The above information is required to register, the index of each item may be registered, and the index of each item may be registered. two。 The separation of the internal protein system is necessary for the purpose and control of the two-dimensional liquid system. The extraction solution of the protein extract was used directly to input the protein, and the automatic analysis was used to separate and separate the protein from the protein of 2000250. The location of the two-dimensional swimming activity is the same as that of the protein index, and the location of the two-dimensional swimming is the same. On one side, the specific antibody of protein 20 was detected, and the tissue distribution was detected by enzyme immunochemical method. At the same time, a device is designed to determine whether to make a special device, Smur100, a special device, a special device, and a known protein profile. 3. The specific protein (bX-27:30, 14-3-3 protein) was isolated. The antibody was detected by immunocytochemistry, and the immunocytochemistry was used. The micro-quantitative method is used to make sure that the parts of the train are distributed separately. A variety of biochemical properties, heterogeneity, protein, enzyme, enzyme, activity, temperature, temperature According to the cDNA method, a decision-making decision is made at one time. During the process, there is a new method for determining the C-terminal acid configuration of protein and protein.