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インドネシアのデングウイルスの蚊接種による分離と新分離株の分子遺伝学的解析

蚊接种法分离印度尼西亚登革热病毒及新分离株的分子遗传学分析

基本信息

批准号：
62041100
负责人：
堀田進
金额：
$ 4.16万
依托单位：
Kanazawa Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Overseas Scientific Research
财政年份：
1987
资助国家：
日本
起止时间：
1987 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-62041100/
关键词：

项目摘要

この調査はインドネシアにおけるデング患者よりウイルスを分離し, 新鮮分離株について同定, 型別を行う他, 遺伝子RNA並びにウイルス構造蛋白の分子生物学的解析を行うことによって, ウイルスの基本的性状とその疫学的・臨床的関連を明らかにしようとするものである. このために, まず患者より可及的多数のウイルスの分離を目指し, ウイルスにとって最も自然であり, 且つ分離効率の高いことが認められている蚊の直接注射法を用いる. 分離ウイルスについては, 各種の生物学的・免疫学的性状を究明すると共に最近進展した分子生物学的手法を用いて, 遺伝子RNA, 構造蛋白の解析を行う. これによって株間の微細な差異を明確にし, 出来得れば臨床的差異や疫学的分布との相関性を明らかにすることを目的とする. このことは究極的には有効なワクチンの開発に連なる可能性があると考えられる.(1)オオカ(Toxorhinchites)を人工飼育し, これにデング熱(D)またはデング出血熱(DHF)患者の急性期血液を胸腔内注射して, ウイルスの分離を試みる. それと共に, デングウイルス(DV)接種蚊の各種組織を電子顕微鏡により観察してDVの蚊細胞親和性並びに感染の時間的経過を詳細に追求する.(2)DおよびDHF患者の各時期の血液を採取し, 臨床血液学的の諸種研究を実施する. とくに出血・凝血機構の異常を重点的に観察することとし, 血小板, プラスミン, トロンビン系の異常並びにその臨床症状及び臨床経過との関連を究明する. 血液材料の一部はDV分離実験(上記および下記)に供する.(3)患者血液を細胞培養, 特にDVに親和性の高いと考えられているハムスター腎細胞(BHK)およびヒトスジシマカ細胞(C6/36)に接種してDVの分離を試みる. 分離されたDV株について各種ウイルス学的・免疫学的検査を実施することによってDVの同定並びに型別を決定する.(4)上記分離DVの代表的なものについて分子生物学的・分子遺伝学的研究を実施する. とくに遺伝子RNA並びにウイルス粒子構造及び非構造蛋白を抽出精製して, ヌクレオチド配列, アミノ酸配列を決定する. 併せて上記RNA, 蛋白の複製に及ぼす各種生物活性物質の影響を検討してウイルス増殖の機構を追求する.現在のところ, 第(2)項の研究の大半を完了した. 第(3)項については, 数株のDVを分離し, それについて諸研究を続行すると共に, 更に多数株の分離を予想している. 第(1)項および第(4)項についてはインドネシアで予備的研究を実施したが, 更に詳細な実験的研究を行うため, インドネシア研究者の了解の下に採取材料の半分を日本に持ち帰り, 目下鋭意研究遂行中で, 今後1年以内に完了の見込みである.

The study was conducted to isolate the virus from patients, identify the type of the fresh isolate, analyze the molecular biology of the gene RNA and its structural proteins, and identify the basic characteristics of the virus and its epidemiological and clinical relevance. The separation of most of them is indicated by the fact that they are accessible to the patient, and the separation efficiency is high. The isolation of these proteins has been investigated in various biological and immunological properties. Recent advances in molecular biology have been made in the analysis of RNA and structural proteins. The fine differences between these strains are clearly identified, and the clinical differences and epidemiological distributions are clearly identified. The possibility of the development of this kind of thing is very high. (1)Toxorhinchites were artificially reared and isolated by intrathoracic injection of blood from patients with acute hemorrhagic fever (DHF). In this paper, we investigate the cell affinity of DV and the time of infection by electron microscope. (2)D Blood samples of DHF patients at various stages were collected and various clinical hematology studies were carried out. To investigate the key findings of abnormalities in bleeding and coagulation mechanisms, platelet, platelet Part of the blood material is separated from DV and supplied. (3)The high affinity of DV in the culture of patient's blood cells was examined. The high affinity of DV in the culture of patient's blood cells was examined. Various molecular and immunological examinations are performed on the isolated DV strains to determine the identity and type of DV. (4)In this paper, the representative of DV is isolated and studied in molecular biology. The RNA and protein structure and non-structural protein were extracted and purified, and the sequence of RNA and protein was determined. It is also noted that RNA, protein replication and the effects of various bioactive substances are discussed in the pursuit of their reproductive mechanisms. Now, most of the research on item (2) has been completed. In item (3), several strains of DV were isolated, and all kinds of studies were carried out, especially the isolation of most strains. In the case of Item (1) and Item (4), the preliminary research shall be carried out, and more detailed research shall be carried out, and the research shall be carried out under the understanding of the researcher, and the materials shall be taken half of the time, and the research shall be carried out at present, and the research shall be completed within the next year.