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精子呼吸促進ペプチドの結合部位タンパク質の特定および局在性

精子呼吸促进肽结合位点蛋白的鉴定和定位

基本信息

批准号：
62540542
负责人：
鈴木範男
金额：
$ 1.09万
依托单位：
Kanazawa University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1987
资助国家：
日本
起止时间：
1987 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-62540542/
关键词：
精子活性化ペプチドウニ卵ゼリー speract 精子

项目摘要

著者らにより, ウニ卵ゼリー層から分類学上の"目"あるいは"亜目"特異的な四種類の精子活性化ペプチド, 及びその誘導体が単離, 構造決定され, その生理作用に対する研究も進行している. 今回は, 精子に対するペプチドの結合部位を明らかにするために, 新しい結合量の定量法を開発し, バフンウニ精子に対する精子活性化ペプチド, speract(Gly-Phe-Asp-Leu-Asn-Gly-Gly-Gly-Val-Gly)を用い実験を行なった. 精子とsperactをインキュベーションした後, 遠心分離により精子を沈澱させ, 上澄に残っている精子に結合していないsperactの呼吸促進活性を測定した. インキュベーション時に加えたsperact濃度による呼吸促進活性との差を見ることにより, 精子に対するsperactの結合量を推定した. この方法は, 放射活性物質による標識を必要としないため実験が容易であり, speractの化学修飾によって起こる精子との結合に対する修飾物質の影響を考えなくてもよいという利点がある. また, 精子を頭部と尾部に分離し, speractの結合量をそれぞれ定量し, インタクト精子に対する結合量と比較検討した. その結果, 3.72×10^<-5>M以下のsperactを含む人工海水中で精子は, 99%以上のsperactと結合することが分かった. 3.72×10^<-5>Mの濃度においては, speractは約50%の呼吸促進活性を示す. また, 精子尾部へのsperactの結合量は, インタクト精子とほぼ同じ値を示したのに対し, 頭部にはほとんど結合しなかった. 頭部は, 精子全体の約83%のタンパク質を含んでいたことから, speractに対する結合物質(タンパク質)は, 尾部に局在していることが明らかとなった. 同様の実験をツガルウニ精子を用いて行なったが, バフンウニの場合とほぼ同様の結果を得ることもできた. この尾部に局在する精子活性化ペプチドに対する結合タンパク質(リセプター)の単離, 精製の研究をさらに進めている.

The authors have studied the four types of sperm activation in the "eye" and "eye" features of the authors, and the authors, and the authors, the sperm, the sperm, This time, the combination of spermatozoa and spermatozoa was detected by quantitative method, and speract (Gly-Phe-Asp-Leu-Asn-Gly-Gly-Gly-Val-Gly) was used to detect sperm motility. After the spermatozoa were treated with speract, the heart was separated from the spermatozoa, and the residual spermatozoa was isolated. The residual sperm was combined with the sperm speract to determine the respiratory activity. The activity of respiration was enhanced by the addition of speract, and the combined amount of sperm speract was inferred. Methods: the radioreactive substance labeling method is necessary. It is necessary to make sure that it is easy to get rid of the problem. The speract chemical method is used to modify the sperm. The tail of spermatozoa was separated, the quantity of speract was quantified, and the combination of sperm and sperm was compared. The results showed that the speract below 3.72 × 10 ^ & lt;-5>M contained sperm in artificial seawater, and more than 99% of the sperm contained sperm in artificial sea water. More than 99% of the samples were separated by speract. 3.72 × 10 ^ & lt;-5>M temperature is very low, and speract is about 50% respiratory promoting activity. The amount of speract in the tail of sperm, the number of sperm in the tail of sperm, the amount of sperm in the tail of spermatozoa, the amount of sperm in the tail of sperm, the number of sperm in the tail of sperm, the number of sperm in the tail of spermatozoa, the number of sperm in the tail of sperm, the number of sperm in the tail of sperm. The total number of spermatozoa is about 83%. The tail of the spermatozoa is located in the tail. In the same way, you can get the same result by using the same method as the sperm. The tail office is in the process of sperm activation, sperm activation and sperm activation.