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種々の型のHGPRT欠損症の重症度の判定と保因者診断のための検査法の開発

开发确定各种类型 HGPRT 缺陷严重程度和携带者诊断的测试方法

基本信息

批准号：
62570303
负责人：
西岡久寿樹
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Tokyo Women's Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1987
资助国家：
日本
起止时间：
1987 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-62570303/
关键词：
痛風部分欠損症保因者

项目摘要

HGPRT欠損症, 痛風及び精神神経症状を呈するX染色体性の遺伝性疾患である. 我々はすでにHGPRT完全欠損症について, その保菌者を確実に診断する方法を開発している. しかし, HGPRT部分欠損症については, いまだ確実に保菌者を診断できる方法はない. 我々は, すでに判明している人間のHGPRT酵素のアミノ酸配列のうち, PRPP結合部位と思われる配列を人口合成した. その, 15アミノ酸からなるペプチドをBSA及びKLHに結合させ, 家兎で免疫して抗体を得た. この抗体は, もちろんのこと, この15アミノ酸よりなるペプチドと結合した. さらに, この抗体がHGPRT酵素を確認できるか否かを検討した. まず, 正常, 及び, HGPRT完全欠損症のB cell line より細胞抽出液を作製した. これらをSDS-PAG電気泳動にかけ, ゲルから電気転写により蛋白質をニトロセルロース膜に移した. その後でニトロセルロース膜を, 抗体によって染色した. 正常のB cell extractはバンドを示したが, HGPRT完全欠損症のB cell extractはバンドを示さなかった. 従って, この抗体は確かにHGPRTを検出できる抗体である. これにより, 細胞抽出液中のHGPRTを蛋白質として検出できるようになった. さらに, 我々はB cell lineをb-thioguanine, δ-azaguanineなどのguanine類似体と培養することにより, 機能的なHGPRTを測定することができるようになった. 以上のような方法が, 保菌者の診断に有効であると考えられるが, HGPRT部分欠損症については, いまだ完全に診断できるまでには至っていない.

HGPRT deficiency, gout, and neurological symptoms are present in X-chromosome genetic disorders. We have developed a method for the diagnosis of HGPRT complete failure and for the preservation of bacteria. HGPRT partial deficiency syndrome is diagnosed by methods that ensure the preservation of bacteria. We have identified the nucleotide sequence of human HGPRT enzyme and the nucleotide sequence of PRPP binding site. In addition, 15 amino acids were added to BSA and KLH, resulting in the production of immune antibodies. The resistance is very strong, and the resistance is very strong, and the resistance is very strong. Today, this antibody is HGPRT enzyme confirmed. The B cell line of HGPRT complete deficiency syndrome was prepared from cell extract. The SDS-PAG electromigration process is a complex process involving the transfer of protein to the membrane. The antibody was stained with a blue dye. The normal B cell extract is not available, but the HGPRT B cell extract is not available. HGPRT antibody is detected in the presence of anti-HGPRT antibody. HGPRT protein in cell extract was detected by ELISA. In this paper, we have B cell line b-thioguanine, δ-azaguanine analogues cultured, functional HGPRT determined. The above methods are used for diagnosis of HGPRT partial deficiency syndrome, complete diagnosis and diagnosis.