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Na.K-ATPaseおよびH.K-ATPaseの分布と細胞内輸送機序の解明

阐明Na.K-ATPase和H.K-ATPase的分布和细胞内转运机制

基本信息

批准号：
62617519
负责人：
田代裕
金额：
$ 0.77万
依托单位：
Kansai Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1987
资助国家：
日本
起止时间：
1987 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

今年度はH, K-ATPaseとNa, K-ATPaseについて種々の細胞生物学的な研究を行った.1. 胃H, K-ATPaseに関する研究(1)H, K-ATPaseの精製, ブタ胃粘膜より本酵素の活性を保ったまま精製した. 胃ミクロゾーム画分を0.1%エマルゲン可溶化後, ポリエチレングリコールにより分画, ブルーセファローズCL6B素通り画分をアミノヘキシルセファロースに結合させ, 0.2MKCl_2容出した. SDS-PAGEで94Kdの単一バンドを示し, K-ATPaseおよびP-NPPase活性を部分的に保持し, 至過PHは7.0であった. 次に精製標品に対する家免抗体を作製し, その特異性をイムノブロット法で確認した. またブタ胃よりmRNAを調製し, 110-120Kd, 94Kd, 32Kd, 成分を検出した. (2)胃壁細胞内カルシウム分布とその変動胃壁細胞よりの胃酸分泌節にCa^+か重要であることはよく知られている. 我々はオリンパスカラー画像解析システムを転用, 胃壁細胞内Ca^+の分布とその動態を解析することに成功した.2.Na, K-ATPaseに関する研究(1)分布ラット腎Na, ATPaseを精製し, ポリクローン抗体を作製した(Akayama et al.,Cell Struct. Funct.11,259(1986). この抗体を用い, ラット膵外分泌腺細胞ならびに唾液腺細胞におけるNa.K-ATPaseの分布について調べ, 腺腔側細胞膜にも少量のNa.K-ATPaseが存在するという結果を得た. しかしその後我々の抗体には問題があることが判明した(交叉反応, あるいは非特異抗体の混在). そこでNa.K-ATPaseのαサブユニットを用い, α特異的抗体を調製し, αサブユニットの分布を調べた. この結果αサブユニットはこれらの細胞の底側面のみに存在することが明らかとなった. (2)βサブユニットの細胞内輸送遺伝子工学的手法を用いβサブユニット種々の人工変異分子を作製し, その細胞内輸送を解析中である.

This year, the study of cell biology of H, K-ATPase, Na, K-ATPase and other species has been carried out. 1. Studies on gastric H, K-ATPase and seminal fluid (1) H, K-ATPase, the activity of this enzyme in gastric mucosa. After the stomach has been dissolved in 0.1% of the time, the stomach has been dissolvable. After the stomach has been dissolvable, the stomach has been dissolvable. After the stomach has been dissolvable, the stomach has been dissolvable, and the stomach has been dissolvable. After the stomach has been dissolved, the stomach has been dissolvable, and the CL6B has been drawn separately, and the 0.2MKCl_2 is tolerated. In the SDS-PAGE 94Kd activity section, the "hold" of the P-NPPase activity section is displayed until PH 7.0. For the second time, the standard product is not antibody-free, and the antibody-free method is specific. 120Kd, 94Kd, 32Kd, mRNA, 32Kd, ingredient. (2) the distribution of intracellular malondialdehyde in the gastric wall is related to the activity of gastric acid secretion in the gastric wall. We studied the distribution of Na, ATPase, antibody in the stomach wall, and the results of Akayama et al.,Cell Struct. Funct.11259 (1986). The antibody was detected in the exocrine glands, the salivary glands, the Na.K-ATPase in the salivary glands, the Na.K-ATPase in the membrane of the glands, and the cells in the glandular cavities. After the test, we asked for the antibody problem. We found that the antibody was mixed with the non-specific antibody. The antibodies against Na.K-ATPase, alpha, alpha. The results show that there are significant differences between the bottom of the cell and the bottom of the cell. (2) the engineering method of β-chlorothiazide intracellular transport is to use several kinds of β-arginine artificial molecules in the process of intracellular transport analysis.