ペルオキシダーゼのX線結晶構造解析と機能に関する研究

过氧化物酶的X射线晶体结构分析及功能研究

• 批准号: 63560084
• 负责人: 森田 雄平
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1988
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1988 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-63560084/
• 关键词: ペルオキシダーゼ; タンパク質X線構造解析; ミエロペルオキシダーゼ; ヘムタンパク質

セイヨウワサビペルオキシダーゼ(HRP)の一次構造、X線構造解析及びヒト白血球ミエロペルオキシダーゼの反応機構についての研究を行い、次のような成果を得た。1.HRPの一次構造ーHRPの中性成分については一次構造が既に明らかにされているが、今回結晶化に成功した塩基性成分については不明であった。電子密度の解釈のためには一次構造の知見が必要であるので本成分のトリプシン及びキモトリプシン消化物の分析を行うことによりその全一次構造を決定した。その結果、本成分は中性成分とは約70%の相同性を有することを明らかにした。2.HRPのX線構造解析ー硫安溶液中より折出させた斜方晶の結晶について4軸回折計でデータの収集を行い、原結晶、白金及び銀の重原子置換結晶の2.8〓までのデータを収集した。まず4〓までのデータを用いて位相決定を行った結果、本酵素の分子外形(60×4.5×4.5〓)、ヘムの位置及びαーヘリックスの配置等の知見を明らかにすることができた。本酵素のヘリックスの配置は既報のチトクロムcペルオキシダーゼの結果と類似性があるが細部においてはかなり異なっている。現在位相決定を3〓まで進め、一次構造の結果を基にポリペプチド鎖のトレースを行っている。3.ヒト白血球ミエロペルオキシダーゼのヘムの決定ーミエロペルオキシダーゼのヘムの構造を決定するためにNMRを用いて検討した。まず本酵素にC^<15>N^<【○!-】>を配位させた錯体を形成し^<15>NーNMRを測定した。次に鉄3価のハイスピン型及びDースピン型(CN-錯体)について^1HーNMRを測定してこれらのスペクトルをヘムモデル錯体と比較した結果、本酵素のヘムはクロリン骨格を持つ事が強く示唆された。現在、大サブユニットのヘム結合部位及びそのアミノ残基の同定について検討している。

One-time reconstruction, X-ray analysis and white blood cell analysis were performed in the first time, and the results were obtained in the anti-drug organization. The results of the research and secondary tests were successful. 1.HRP has successfully crystallized the basic components of HRP, which is the key component of the neutral component. It is necessary to know that it is necessary to analyze the components and components of the electronic density system at one time. The results show that the neutral components of this component are about 70% of the same. 2.HRP X-ray analysis of Rhombohedral Rhombohedral crystals in thioampere solution by X-ray analysis. The results show that the Rhombohedral crystals in thioampere solution have been analyzed by X-ray analysis, and the results have been analyzed by X-ray analysis. The results of the experiment, the molecular shape of the enzyme (60 × 4.5 × 4.5), the position of the enzyme and the configuration of the enzyme were determined by the phase analysis. This enzyme is not only used in the system, but also in the system. The results are similar. At present, the phase determines that you will make progress in the next few years, and the results will be improved. 3. The white blood cells, the white blood cells, the white blood cells, This enzyme C ^ & lt;15> N ^ & lt; [0x -] & gt; coordination error forms the ^ & lt;15>N NMR determination. In the second half of the year, the results were compared between the two types (CN- wrong body) and D-type (CN- wrong body). The results of this enzyme were compared with the results of the results, and the results of this enzyme were analyzed. At present, the joint and the residue of the plant are the same as those of the joint.

项目成果

Y.Morita: Journal of Biochemistry. 103. 693-699 (1988)

Y.Morita：生物化学杂志。