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遺伝子クローニングを含めたマラリア原虫形質膜H^+-ATPaseの分子生物学的研究

疟原虫质膜H^+-ATP酶的分子生物学研究，包括基因克隆

基本信息

批准号：
63570181
负责人：
高田季久
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Osaka City University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1988
资助国家：
日本
起止时间：
1988 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-63570181/
关键词：
マラリアプロトン遺伝子クローニング ATPase 膜輸送プラスモディウム

项目摘要

1.マラリア原虫形質膜におけるH^+移動と代謝物輸送マラリア原虫寄生赤血球におけるブドウ糖膜輸送の変化の機構をH^+(プロトン)移動との関連において検討した。結果は次の様である。(1)P.yoelii寄生赤血球においてブドウ糖類似体である2デオキシグルコスの取り込みが著しく高まる。(2)速度論的解析から寄生赤血球膜に小孔が出現し、受動的に2デオキシグルコースが寄生赤血球に流入することを認めた。(3)寄生赤血球に流入した2デオキグルコースは濃度勾配に反して能動的にO.yoelii内に取り込まれる。(4)各種代謝阻害剤を用いた結果、P.yoeliiへの2デオキシグルコースの取り込みはプロトンの流入と共役することを認めた。これはH^+/ブドウ糖共輸送系の存在をマラリア原虫において始めて示すものである。2.マラリア原虫形質膜H^+・ATPase遺伝子のクローニングの試み(1)酵母(S.cerevisiae)の形質膜H^+・ATPase遺伝子を参考にして21塩基のオリゴヌクレオチドを合成し、これをプローブにした。(2)入ファージを用いて作成したP.falciparum及びO.yoeliiの遺伝子ライブラリーをスクリーニングした結果、強度の異なるいくつかのクローンを得た。(3)上のファージクローンをプラスミドpUC19にサブクローンし、M13・ジデオキシ法により部分的に塩基配列を決定した。(4)得られた塩基配列を他生物種のATPaseとコンピュータ処理で比較したところ、1つのクローンはウサギ筋小胞体のCa^<2+>・ATPaseのトランスメンブレン領域やCa^<2+>結合領域などと高い相同性を示した。

1. The relationship between H ^+ movement and metabolite transport in the plasmalemma of the malaria parasite and the transformation of the mechanism of sugar membrane transport in the red blood cells of the malaria parasite is investigated. As a result, the number of times he died was reduced. (1) P. yoelii parasite erythrocytes are highly sensitive to sugar analogues. (2)The analysis of velocity theory shows that parasitic red blood cell membrane pores appear and are activated. (3)Parasitic erythrocytes flow into the 2 nd floor of the building. (4)A variety of metabolic inhibitors were used in the study. The existence of H^+/D sugar co-transport system 2. The study on the synthesis of protozoan plasma membrane H+·ATPase gene (1) The synthesis of protozoan plasma membrane H+·ATPase gene in yeast (S.cerevisiae). (2)In addition to the above, the use of P. falciparum and O.yoelii in the preparation of genetic information, the intensity of different types of information. (3)On the other hand, the UC19 has been selected for the first time, and the M13 has been selected for the second time. (4)The ATPase of other biological species was compared with the Ca^<2 +> binding domain of the ATPase and the Ca^<2+> binding domain.