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Clostridium difficileの毒性産生機構に関する研究

艰难梭菌产毒机制研究

基本信息

批准号：
63570189
负责人：
中村信一
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Kanazawa University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1988
资助国家：
日本
起止时间：
1988 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-63570189/
关键词：
Clostridium difficile 毒素胞子

项目摘要

有毒Clostridium difficile3株(KZ1604、1630、1660)を用いて胞子形成とサイトトキシン(CT)産生の関係を経時的に検討した。対数増殖期に同調した各菌液を10^6倍希釈した後、その0.2mlを10mlの0.2%Na_2PO_4加BHI培地に植菌した(接種菌数:栄養型細胞数、2.6〜4.8×10^1;胞子数、0)。全菌株とも植菌18時間後に総菌数(栄養型細胞数+胞子数)は最高値に達した(3.1〜3.8×10^8/ml) 。一方胞子は18時間後より検出され経時的に増加し、42〜48時間後にプラトーに達した(6.2×10^5〜8.2×10^6/ml)。細胞内CTは胞子形成時期と同時期(培養18時間)より出現し、胞子数の増加と共に増加し、胞子数がプラトーに達する6〜12時間前に最高値に達した(64〜512CU/50μl)。細胞外CTの検出は植菌後24時間よりみられ植菌48時間後に最高値に達した(64〜4096CU/50μl)。これらの結果より、CT産生が胞子形成とほぼ同時期に行われることが明らかとなった。胞子形成とCT産生の関係を更に確かめるため、胞子形成阻害剤アクリジンオレンジ(AO)、プロメサジン(PM)を用いた実験を強毒株KZ1630を用い行った。植菌12時間後にAOを培地に加え(30μg/ml)培養を続けた。AO添加培養における総菌数は対照と差異は認めなかったが、胞子数は植菌48時間後において1.1×10^2/mlにすぎず対照(5.2×10^6/ml)に較べ著明に低下していた。AO添加培養における細胞内CT値は対照の1/4〜1/8にすぎなかった。細胞外CT値はAO添加培養では顕著に減少し植菌36、48、60、72時間後の値は各々8、32 、128、128CU/50μlにすぎなかった(対照:1024、4096、4096、4096CU/50μl)。PM添加培養でも同様の傾向が認められた。これらの結果より胞子形成がCT産生に密接に関与している事が示唆された。光顕的に胞子は認められないがCTを産生する菌株について電顕的観察を行った。これらの菌株では電顕的にも胞子形成過程は認められず、胞子無形成菌におけるCT産生機序は胞子形成菌のそれとは異なる事が示唆された。

Toxic Clostridium difficile 3 strains (KZ1604, 1630, 1660) use the spores to form CT (CT), which is a common disease. After counting the growth period, each bacterial solution is 10^6 times the same as the original one, and the 0.2ml is 0.2% Na_2P for 10ml. O_4 plus BHI cultured inoculated bacteria (number of inoculated bacteria: number of trophic cells, 2.6~4.8×10^1; number of spores, 0). The total strain reached the highest bacterial count (3.1~3.8×10^8/ml) after 18 hours of inoculation (number of trophic cells + number of spores). When the spores of one side are released after 18 hours, the より検され経 is added, and the 42~48 hours later にプラトーに达した (6.2×10^5~8.2×10^6/ml). Intracellular CT shows the appearance of spores at the same time as the spore formation period (culture time 18), the number of spores increases, and the total number of spores increases. The number of spores reached the highest level 6~12 hours ago (64~512CU/50μl). The results of extracellular CT showed that the highest value was obtained 24 hours after inoculation and 48 hours after inoculation (64~4096CU/50μl). The result of これらの is より, and the spores formed by CT are formed at the same time. The relationship between spore formation and CT production is correct and the spore formation inhibitor is the same. (AO), PM (PM) is a highly virulent strain KZ1630. After 12 hours of inoculation, the culture was carried out with the addition of AO (30 μg/ml). AO addition culture, the number of bacteria, the number of bacteria, the difference, the number of spores, the number of bacteria, the number of bacteria, the difference after 48 hours of cultivation, the difference 1.1×10^2/ml にすぎず対色(5.2×10^6/ml) is lower than べ淜明にしていた. AO was added to culture the intracellular CT of 1/4~1/8 of the cells. The extracellular CT value and AO addition culture showed that the bacterial growth was reduced after 36, 48, 60, and 72 hours, and the value was 8 and 32 respectively. , 128, 128CU/50μl にすぎなかった (対毾: 1024, 4096, 4096, 4096CU/50μl). PM addition culture is the same as the tendency of cultivation.これらの Results より spores are formed がCT produces に Close connection and している事がshows instigation された. The spores of the phosphorus are produced by the spores of the spores of the められないがCTを and the する strain is produced by the について电镕榳看を行った. The process of sporulation formation of これらの strain では电顕はcognition められず, sporulation-free bacteriaにおけるCT production sequence は spore-forming bacteria のそれとはdifferent なる事がshows instigation された.