权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

反復性血栓症患者にみられた異常血液凝固制御因子の機能と構造の解析

复发性血栓患者凝血调节因子功能及结构异常分析

基本信息

批准号：
63570604
负责人：
村山英樹
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Jichi Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1988
资助国家：
日本
起止时间：
1988 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.血液凝固反応制御因子の一つ、Protein C(PC)の異常分子。PC tochigiの遺伝子クローニングし、その異常部位の解析を行った:PCのcDNAをプローブとして、正常及び患者の血液より単離したDNAを種々の酵素で消化後、サザンブロットを行った結果、患者PC遺伝子には大きな欠失は認められなかった。また、正常及び患者のDNAをHind IIIで消化後、その17ー19Kb断片を用いてgenomic libraryを作製し、PC遺伝子クローニングを行った。Exon I〜IX及び5ーflanking regionを含む領域を、dideoxy法で塩基配列を決定した結果、患者PC遺伝子のExon VIに、一塩基置換(C→T)が見出され、PC tochigiはH鎖Arg^<12>のコドン(CGG)がTrp(TGG)のコドンに置換していることが明らかとなった。従ってPC tochigiではThrombinによる活性化反応が起らず、患者は血栓傾向症状を示したものと思われる。2.再発性静脈血栓症患者より、スロンビンやXa因子を阻害せず免疫学的に一部差の見られる異常アンチスロンビンIII(ATIII)を精製し、これらの異常が蛋白質部分の違いに由来することを、正常ATIIIと異常ATIIIを用いて、近紫外CDースペクトラムの分析することで明らかにした。3.異常ATIIIの血管内皮細胞との相互反応:精製した正常、異常ATIIIを^<125>IーNaで標識し、培養したヒト臍帯内皮細胞と反応させると、結合量は異なるが経時的な内皮細胞への結合が見られた。細胞をあらかじめスロンビンやHeparinで処理すると、結合量が増加するが、異常ATIIIの結合量増加は正常ATIIIの場合より少ない。培養内皮細胞上におけるATIIIのスロンビン及びXa阻害活性は、精製蛋白標品Xa、prothrombinを用いた再構成系でのスロンビン生成阻害活性を測定した結果異常ATIIIは全く酵素阻害活性を示さないことが明らかとなった。従って、患者ATIIIは血管内皮細胞への結合能は一部残存しており、スロンビンなどの刺激で増加するが、液相系での反応と同様に異常ATIIIの活性は回復しないことが明らかとなった。

1. Blood coagulation inhibition factor, Protein C(PC) and abnormal molecules. Analysis of PC tochigi DNA fragments and abnormal parts:PC cDNA fragments, normal and patient blood fragments, DNA fragments, enzyme digestion, DNA fragments, patient PC cDNA fragments, large and small fragments, and abnormal parts. The DNA of normal and sick patients was digested, and the 17 - 19Kb fragment was produced by genomic library and PC gene library. Exon I ~ IX and 5-flanking regions include the following regions: Dideoxy method, base assignment determination, Exon VI, base substitution (C→T), PC tochigi, H-lock Arg^<12>, CGG, Trp(TGG), and base substitution determination. The PC tochigi is activated and the patient has a tendency to thrombosis. 2. In patients with recurrent venous thrombosis, the presence of factor Xa in the immune system is a part of the difference in the presence of abnormal factor III(ATIII), the purification of the abnormal protein fraction, the use of normal ATIII and abnormal ATIII, and the analysis of near-ultraviolet CD. 3. Abnormal ATIII and endothelial cells interact with each other: purified normal, abnormal ATIII and endothelial cells interact with each other in different amounts in culture<125>. The amount of binding increased when cells were treated with Heparin, and the amount of binding increased when abnormal ATIIs were treated with Heparin. ATIII enzyme activity and Xa inhibition activity in cultured endothelial cells were measured with purified protein Xa and prothrombin in a reconstituted system. Abnormal ATIII enzyme activity was detected. The binding energy of ATIII in vascular endothelial cells of patients was partially increased after stimulation, and the activity of ATIII in liquid phase was restored after stimulation.