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実験動物における高多型DNAマ-カ-の開発とGerm-lineでの安定性の検討

实验动物高度多态性DNA标记的开发及种系稳定性研究

基本信息

批准号：
63580036
负责人：
小泉勤
金额：
$ 1.09万
依托单位：
Kanazawa University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1988
资助国家：
日本
起止时间：
1988 至 1990
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-63580036/
关键词：
染色体地図 DNAマ-カ-実験動物マウスラット遺伝的多型 DNAマーカー

项目摘要

本研究はマウス、ラットにおけるLinkage解析において有用となる高多型性を示すDNAマ-カ-を見いだし、そのDNAマ-カ-について染色体上の位置を明らかにする。また、多型のうち、Variable Number of Tamdem Repeat(VNTR)によるものについては、Germ-lineでどの程度安定に保たれるか検討を加えることを目的とする。平成元年度までの研究成果並びに進行状況は以下のごとくである。マウス、ラットのGenemic Libraryから分離したクロ-ンについてBiotin標識、によりDNA Probeを作成し、マウス、ラットについて遺伝的変異を検出しやすいと思われる系統それぞれ5系統を選び、抽出したDNAについてヒトで多型が多く認められている制限酵素を用い、サザンブロットによりRFLPsを示すクロ-ンのスクリ-ニングを行った。現在まで検討したなかではまだRFLPsを示すクロ-ンは得られていない。引き続き、検討を要する。DNAマ-カ-を染色体に帰属する方法として従来はProbe DNAをラジオアイソト-プ標識によるin situ hybridization法は結果がでるまで3週間程度を要すること、多くの経費を要すること、R1を使うことによる危険性があること、標識したProbeの保存ができないことなど種々の問題がある。迅速で経済的な方法を検討した。その結果、Probe DNAをBiotinで標識し、金コロイド結合した抗体で検出する方法を確立した。この方法によりマウスとラットのミエリン塩基性タンパク質遺伝子(Mbp):マウスのアルギノサクシネ-トリア-ゼ遺伝子(Asl):アルギノサクシネ-トシンセタ-ゼ遺伝子(Ass)のマッピングを行いこれらの遺伝子の染色体上の位置を明らかにした。またAs1については多型が見られることから、DNAマ-カ-として利用できることから、現在この遺伝子のlinkageマップを検討している。これらの結果については投稿中あるいは投稿準備中である。

In this study, the positions of DNA on chromosomes were clearly identified in Linkage analysis. The Variable Number of Tamdem Repeat(VNTR) can be used to determine whether the Tamdem Repeat(VNTR) is stable or not. In the first year of Heisei, the research results and progress status are as follows: The Genomic Library of DNA is divided into five systems: selection, extraction, restriction enzyme application, RFLPs display, identification of Biotin, DNA Probe creation, identification, and detection of genetic diversity. Now we're talking about RFLPs. The first two days of the meeting, the second three days of the meeting, the third three days of the meeting, the fourth day, the meeting, the fourth day, the fourth day, the meeting, the fourth day, the The method of DNA-chromosome identification is to identify the Probe DNA in situ hybridization method. The result is to determine the degree of risk within 3 weeks. The method of identification is to identify the Probe DNA in situ hybridization method. A quick way to find out. The results, Probe DNA identification, gold binding and antibody detection methods were established. The method includes the following steps: (1) determining the position of the gene on the chromosome of the gene (Mbp):(2) determining the position of the gene (Asl):(3) determining the position of the gene on the chromosome of the gene (Ass);(4) determining the position of the gene (Asl):(5) determining the position of the gene on the chromosome of the gene (Asl);(6) determining the position of the gene on the chromosome of the gene (Asl);(7) determining the position of the gene on the chromosome of the gene (Asl);(8) determining the position of the gene on the chromosome of the gene (Asl);(9) determining the position of the gene on the chromosome of the gene (Asl); and (10) determining the position of the gene on the chromosome of the gene (Asl). As a result, the DNA polymorphism is discussed in detail. The results of this article are in the process of preparation.