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ペプチド免疫による生理活性物質の高度精製法の開発

开发利用肽免疫的生理活性物质的高级纯化方法

基本信息

批准号：
01550733
负责人：
佐田栄三
金额：
$ 0.96万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1989
资助国家：
日本
起止时间：
1989 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

免疫アフィニティクロマトグラフィ-はバイオ生産物の精製の有力な手段であるが、精製目的物質を失活させることなく回収することが重要である。このためには、穏和な条件で目的物質を解離する抗体リガンドを入手することが必要である。本研究では、抗原としてのアミノ酸の特性が抗原-抗体解離特性に与える影響を明らかにするために、ph6前後で荷電状態が変化するヒスチジンを含むペプチドと、そのヒスチジンを非極性のアミノ酸であるアラニンで置換したペプチドに対する抗体の抗原吸着特性を検討した。また、タンパク質(ミオグロビン)の一部のアミノ酸配列部分を免疫して得た抗体とタンパク質の結合特性も検討した。得られた主な結果は1.ヒスチジンを3個所に含む10残基のペプチドに対する抗体は中性phに近いph6付近で抗原の結合量が急激に減少した。また、このヒスチジンの内の1つが抗原-抗体結合に必須で、これをアラニンに変えたペプチドは結合しなかった。2.上記ペプチドの必須のヒスチジンをアラニンに変えたペプチドに対する抗体の抗原結合量のph依存性はヒスチジンを含む場合に比べて小さかった。これらの結果から、抗原決定基にヒスチジンを含む部分を免疫すれば、中性ph付近で抗原と解離するアフィニティクロマトグラフィ-に適した特性の抗体が得られる。3.ミオグロビンのアミノ酸配列の一部をなすペプチドを免疫して得た抗体は、ミオグロビンからヘム鉄を除去したアポミオグロビンと結合し、また酸性ph領域でミオグロビンとも結合した。この抗ペプチド抗体は比較的構造の自由度の大きい状態のもとのタンパク質と結合すると考えられる。

A powerful means of purification of the product is important for inactivation of the purified target substance. This is a necessary condition for the dissociation of the target substance. In this study, we investigated the effects of antigen and non-polar acid on the antigen-antibody dissociation characteristics, including the change of charge state around pH6, and the antigen adsorption characteristics of non-polar acid. A part of the antibody binding properties of the antibody is obtained. The results showed that the binding amount of the three residues was significantly reduced. 1. Antigen-antibody binding is required in this case. 2. Note that the ph dependency of the antibody binding amount is smaller than that of the antibody binding amount. The result is that the antigen determinant contains a portion of the antigen and the antibody is isolated. 3. A part of the acid sequence of the protein is isolated from the antibody, and the protein is isolated from the protein. The anti-tumor antibody is compared with the structure of the large degree of freedom and the state of the body and the quality of the binding.