細菌広宿主域ベクタ-を用いる植物への遺伝子導入

使用细菌广宿主范围载体将基因转移到植物中

• 批准号: 01560114
• 负责人: 矢野 圭司
• 金额: $ 1.02万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1989
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1989 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01560114/
• 关键词: トマト野性株; トマト培養細胞; プスラミド; カナマイシン耐性化遺伝子; 形質転換系; 形質転換頻度; エレクトロポレ-ション法; カルシウム緩衝液

対象とする植物としてトマトを選び,その野生株(Lycopersicon peruvianum)を取りあげた。しかしながら植物成体そのものを取扱うことは繁雑で,長期間を要し,また栽培施設の管理などの問題を必ず解決せねばならない。1.トマト培養細胞の形質転換系の確立すでによく基礎的知見の得られている野性株トマト(L.Perurianum)のプロトプラストを酵素混液を用いて作成,エレクトロポレ-ション法で検討した。マ-カ-遺伝子としてカナマイシン耐性化遺伝子(npt II)を持つpUC18HS(最終濃度50μg/ml)を導入することから始めた。環状のままのプラスミドをキャリア-DNA(最終濃度50μg/ml)とともに導入する。エレクトロポレ-ションはパルス巾を30μsに固定し,0〜2.5KV/cmの電界強度の短形波パルスを1回かける。プロトプラストをエレクトロポレ-ション用緩衝液に懸〓して,種々のパラメ-タを変化させて形質転換頻度の比較を行った。その結果,エレクトロポレ-ション用緩衝液としてカルシウム緩衝液を使用して熱ショック処理(45℃,5分)を与えた後,PEG溶液(18%PEG6000,6mM MgCl_2,0.1%MES,0.4Mマニト-ル,pH5.8)を8%となるよう混合した場合,1.5KV/cmの電界強度で供試プロトプラスト当り,最大4.5×10^<-4>の形質転換頻度が得られ,他の植物の系と比較しても高頻度で形質転換体を得ることが可能となった。2.シクロヘキシミド耐性化遺伝子をマ-カ-とする形質転換一般に真核細胞の分子遺伝学で用いる遺伝子マ-カ-は有効なものが少い。シクロヘキシミド耐性化遺伝子をマ-カ-としてトマト培養細胞系に用いる試みを進めた。今のところ遺伝子発現のレベルでの障害を取除くことはできていない。

For example, the wild plant (Lycopersicon peruvianum) In the long run, it is necessary to solve the problem of plant management. 1. The establishment of morphological and biochemical transformation system of cultured cells is based on the knowledge and knowledge of wild plants (L.Perurianum). Npt II is introduced at a final concentration of 50μg/ml. Cyclic DNA(final concentration 50μg/ml) and DNA introduction The electric field intensity of 0 ~ 2.5KV/cm is fixed at 30μs, and the short wave length is 1 cycle. Comparison of the frequency of physical and chemical changes in the suspension of seed in buffer solution As a result, after the buffer solution was used for the heat treatment (45℃, 5 min),PEG solution (18%PEG6000, 6mM MgCl_2, 0.1%MES,0.4M MES, pH 5.8) was mixed at 8% and 8% respectively. When the electric boundary strength of 1.5KV/cm was tested, the maximum of 4.5×10^<-4>and the frequency of mass exchange were obtained. The plant species were compared with each other and the high frequency of mass exchange was obtained. 2. The molecular genetics of eukaryotes in general is characterized by the following: Sicuro Now, we have to remove the obstacles caused by the emergence of the new generation.