急速凍結置換固定法による食道過敏性亢進時の気道粘膜上皮細胞の微細形態学的研究

快速冷冻替代固定法对食管高反应期间气道黏膜上皮细胞的微形态学研究

• 批准号: 01570435
• 负责人: 池田 大忠
• 金额: $ 0.83万
• 依托单位: Yokohama City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1989
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1989 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01570435/
• 关键词: 気道過敏性; 急速凍結置換固定法; 気道粘膜上皮; 微細形態学; 動物喘息モデル; オゾン

気道過敏性亢進時の気道粘膜の微細形態について、急速凍結置換固定法を用いて人工産物の発生を最小限に抑え、生体内で機能している状態を反映した像を得ることにより、これまで知られてきた所見を吟味し、また新たな特有の所見を見いだすことを目的として研究を行った。実験動物にはモルモットを用い、オゾン曝露によって、あるいは卵白アルブミンで経気道感作して得た喘息モデルを抗原で暴露して、気道過敏性を亢進させた。これらの群及びコントロ-ル群の気管および末梢気道を急速凍結置換固定法で処理し、それらの微細形態を群間で比較するとともに、従来の化学固定法で得られてきた所見とも比較検討した。急速凍結置換固定法で処理された試料は、凍結の良好な場所では膜構造や細胞内小器官の保存がよく、精緻な微細形態が得られたが、従来の化学固定法で得られた所見との間には明瞭な差異はなかった。オゾン曝露群では、いずれの方法でも、上皮細胞の剥離が随所にみられ上皮層は重層化していたが、上皮細胞自由表面近くのtight junctionの解離は認められなかった。剥離細胞や剥離しつつある細胞では、細胞質内に多数の空泡が認められる点、両方法に共通していた。喘息発作誘発群では、上皮細胞自由表面やその周囲の微細形態に特徴的な所見は得られなかった。上皮細胞層内及び気道腔浸潤細胞には、いずれの方法でも、また占める比率に差はあるもののいずれの群でも、好中球、好酸球、リンパ球が認められた。急速凍結置換固定法で処理された試料では、喘息発作誘発群で好酸球特異顆粒のcore部分のdensityがオゾン曝露群に比し高い傾向が認められたが、特異顆粒の微細形態に新しい所見は得られなかった。技術的な面では、気管や中枢気管支の急速凍結は、膜様部の粘膜面を液体He温度に冷却した純銅ブロックに圧着する方法を用いたとき、観察可能な凍結試料を得る上で最も効率が良かった。

In the case of hypersensitive airway, the fine morphology of airway mucosa, rapid freezing and displacement fixation method, minimum limit of artificial product production, reflection of internal function and image acquisition, knowledge and observation, taste and new unique observation, etc. were studied. The animals were exposed to the presence of anti-inflammatory agents, anti-inflammatory agents and anti-inflammatory agents. The rapid freezing and fixation method of the group and the terminal channel are compared with each other. The rapid freezing and replacement fixation method is used to treat the sample, freeze the membrane structure, preserve the small organs in the cell, and obtain the fine morphology. The epithelial cells were separated from the exposed group and the upper cortex was stratified. The free surface of the epithelial cells was close to the tight junction. The cells are separated and most of the vacuoles in the cytoplasm are identified. The free surface of epithelial cells and the fine morphological features of the surrounding cells were observed. The epithelial layer and the tract cavity infiltrate the cells in a way that is different from the cells in a cell. The rapid freezing and displacement fixation method is used to treat the sample, and the density of the core part of the specific particle of the acid ball is higher than that of the exposed group. The method of rapid freezing of the surface of the tube and the central tube, cooling of the film surface and the temperature of the pure copper sample is used to detect the possible freezing of the sample.

项目成果

H.Ikeda: "An ultrastructural analysis of airmay epitheliulm induced hyperresponsiveness-Stundy with rapid treezing followed by treeze-substitution"

H.Ikeda：“对空气上皮诱导的高反应性的超微结构分析 - Study 快速树化，然后进行树化替换”