Dendritic cellの分化因子の精製とcDNAのクロ-ニング

树突状细胞分化因子的纯化及cDNA的克隆

• 批准号: 02807040
• 负责人: 高橋 聖之
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: Okayama University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1990
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1990 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02807040/
• 关键词: 樹状細胞; サイトカイン; 分化因子

報告者は一例の悪性組織球症患者の末梢血より悪性組織球症細胞(MH細胞)と、これに親和性を示すhelper T cellを得た。後者はILー2存在下で前者を樹状細胞に分化させる液性因子を分泌することを発見し、これに樹状細胞分化因子(dendritic cell differntiation factor,DCDF)と名付けた。今回の研究ではこのDCDFの分離精製を行いcーDNAのクロ-ニングに必要な情報と材料の確保という基本的な成果が得られた。まず、DCDFの粗分画は培養上清を硫酸アンモニウム分画を行い、60〜70%飽和硫安沈澱分画を得、これを20mM TrisーHCI buffer,pH7.8に対して透析を行った。これをファルマシアFPLCシステムをもちいてカラムクロマトグラフィ-を行って精製した。まず、陰イオン交換クロマトグラフィ-としてMonoーQクロマトグラフィ-を行うと、活性分画は素通り分画に得られた。これを濃縮し、20mM TrisーHCI buffer,pH7.4に対して透析し、陽イオン交換クロマトグラフィ-としてMonoーSクロマトグラフィ-を行った。すると、活性分画は吸着分画として現れた。この分画をさらに濃縮し、ゲル漉過クロマトグラフィ-を行うと、活性分画は分子量約40kdの部分に現れた。これをSDSーPAGEを行うと、40kdのバンドのほかに数本の共雑蛋白のバンドがみられ、完全精製には至っていない。この部分精製DCDF標品を用いてDCDFの血液単球に対する作用を検討した。DCDFは血液単球に対して突起形成などの形態学的な樹伏化、HLAーDR抗原の発現を著明に強め、またCD1抗原の発現を誘導した。DCDFは完全精製には至っていないので、cーDNAクロ-ニングにまでは至っていない。

The reporter obtained a case of histioglomerosis cells (MH cells) and affinity helper T cells in the peripheral blood of a patient with histopenia. In the presence of IL-2, the former secretes dendritic cell differentiation factor (dendritic cell differentiation factor, DCDF) and secretes secretion of dendritic cell differentiation factor (DCDF). This time's research is based on the separation and purification of DCDF, the DNA, and the necessary information and materials to ensure the basic results.まず, DCDF coarse fractionation, culture supernatant, sulfuric acid Anoline fractionation, 60~70% saturated sulfide precipitate fractionation, 20mM Tris HCI buffer,pH7.8 is suitable for dialysis.これをファルマシアFPLCシステムをもちいてカラムクロマトグラフィ-を行ってRefinedした.まず, 音イオン exchange クロマトグラフィ-としてMonoーQクロマトグラフィ-を行うと, active dividing draw は Sutong り分drawing られた.これをconcentratedし、20mM TrisーHCI buffer, pH7.4 dialysis, Yang イオン exchange クロマトグラフィ-としてMonoーS クロマトグラフィ-を行った.すると、Activity separation painting は Adsorption separation painting としてappearance れた.この片をさらにConcentrated し, ゲル クロマトグラフィ-を行うと, and active flakes are part of the molecular weight of about 40kd and are now れた.これをSDSーPAGEを行うと, 40kd のバンドのほかに本の公雑protein のバンドがみられ, completely refined には to っていない. Part of the purified DCDF standard is used as a blood pellet of DCDF. DCDF has a morphological morphology of the blood cells and the protrusions, HLA has a strong DR antigen, and a CD1 antigen has induced the morphology. DCDF is completely refined, and cーDNA is completely refined.