Molecular Mechanisms of tRNA Selection on the Ribosome

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Der Mechanismus der Aminoacyl-tRNA-Selektion am Ribosom soll kinetisch und strukturell weiter untersucht werden. Drei Fragenkomplexe werden im Mittelpunkt stehen. Einmal sollen unter Bedingungen hoher Selektivität die Anteile initialer Selektion und Fehlerkorrektur (proofreading) bei der Diskriminierung fast-korrekter Aminoacyl-tRNA auf verschiedenen mRNA-Codons bestimmt werden, um daraus Rückschlüsse auf die Situation in vivo zu ziehen. Zum andern sollen Konformationsveränderungen der 16S rRNA, die durch Codon-Anticodon-Wechselwirkungen hervorgerufen werden, untersucht werden. Damit soll Aufschluß darüber gewonnen werden, wie strukturelle Veränderungen des Ribosoms die Bindung der Aminoacyl-tRNA beeinflussen. Diese Versuche werden sich auf das Decodierungszentrum und die Region um Nucleotid 912, für die alternative Konformationen charakterisiert worden sind, konzentrieren. Auch soll der Einfluß von Antibiotika, die an diese Regionen der 16S rRNA binden, auf die Kinetik der Aminoacyl-tRNA-Bindung untersucht werden. Schließlich soll die Auswirkung von Mutationen in der tRNA, die die Stabilität der Tertiärstruktur beeinträchtigen und zu einem erhöhten Fehler bei der Codon-Erkennung führen, auf die Kinetik der A-Stellenbesetzung untersucht werden.