Die Aktivitäten des Replikationsinitiator-Proteins alpha des E. coli Satellitenphagen P4

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Das a-Genprodukt (gpa) des Phagen P4 ist bisher das einzige multifunktionelle Replikationsprotein, das spezifische Originerkennung, 3'-5' Helicase- und Primaseaktivität vereint. Als einziges phagencodiertes, für P4-Replikation essentielles Protein mit ausgeprägter Domänenstruktur dient es uns als Modellsystem zum Studium funktioneller Domänen und deren Interaktion am Beispiel der Replikation und deren Regulation. Die P4-Replikation wird vom P4-Cnr-Protein negativ reguliert, das die Bindung von gpa an den Origin stimuliert. Mit dem bakteriellen two hybrid system sollen Cnr-Interaktionsdomänen von gpa charakterisiert werden. Der Einsatz von Punkt- und Deletionsmutanten soll die Frage beantworten, ob die DNA-Bindungsregion und die ATPase/Helicasedomäne in Subdomänen unterteilt sind. Dabei wollen wir die funktionelle Bedeutung von Sequenzmotiven in gpa klären, die bei putativen Helicasen kleiner Eukaryontenviren konserviert sind. Schließlich werden unsere Sudien auf den E. coli Phagen N15 ausgedehnt, der als lineares Plasmid repliziert und das potentielle gpa-Analogon RepA und eine Telomerase codiert.