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単純ヘルペス潜伏感染に及ぼす分化誘導剤ヘキサメチレン・ビスアセタミドの影響

分化诱导剂六亚甲基双乙酰胺对潜伏性单纯疱疹感染的影响

基本信息

批准号：
02670902
负责人：
梁川哲雄
金额：
$ 1.22万
依托单位：
The University of Tokushima
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1990
资助国家：
日本
起止时间：
1990 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ヒト神経芽腫細胞(IMRー32)を用いてin vitroにおける単純ヘルプスウイルス2型(HSVー2)の潜伏感染モデルを調製し、癌治療剤として現在臨床試験が行なれている分化誘導剤であるHexamethylene bisacetamide(HMBA)のHSVー2潜状感染系でのウイルス再活性化に及ぼす影響を解析し、以上に述べる研究結果を得た。1.IMRー32細胞にHSVー2を感染多重度0.1で感染させ、14日間40℃で培養するとin vitroにおけるHSVー2潜状感染系が確立した。培養温度を40℃から37℃に降下させると、ウイルスの再活性化が2日後に出現した。培養温度を37℃に降下させた時、5mM HMBAを含む増殖培養液でHSVー2潜状感染IMRー32細胞を37℃で更に培養を継続すると、HSBー2の再活性化率は未処理対照に比較して有意に上昇した。加えて、HMBA存在下で培養したHSVー2潜状感染IMRー32細胞のDNA methylationレベルは、未処理対照に比較して有意に低下していることが、二次元薄層クロマトグラフィ-を用いたメチルシトシンの測定及び制限酵素(HpaIIとMspI)を用いたDNA切断パタ-ンのデンシトメ-タ-を用いた解析により、明らかになった。一方、0.5μg/mlのシクロスポリンAの存在下でHSVー2潜状感染IMRー32細胞を37℃で培養した時、HSBー2再活性化率の有意の低下が認められた。2.上記のin vitroにおけるHSVー2潜状感染モデルでの、HMBAのウィルス再活性の促進活性に及ぼすアシクロビル及びヒトインタ-フェロン(hIFN)ーα,β,γによる影響を解析した。培養温度を40℃から37℃に降下させた時、5mM HMBAと種々な濃度のアシクロビル或いはhIFNーα,βγとを含む増殖培養液に交換し37℃にて更に培養を継続した。その結果、6、5μMアシクロビル、25単位/mlのhIFNーα,β及び100単位/mlのhIFNーγにて有意にHMBAのHSVー2再活性化の促進作用の抑制れることが明らかになった。

The results of the study described above are based on the analysis of the effects of Hexamethylene bisacetamide(HMBA), a differentiation inducer, on the reactivation of HSV-2 latent infection in vitro and on the modulation of HSV-2 latent infection in vitro by cancer therapy agents. 1. IMR-32 cells were infected with HSV-2 at a multiple severity of 0.1 and 14 days after incubation at 40 ° C. A latent HSV-2 infection line was established. The temperature of incubation decreased from 40℃ to 37℃, and the reactivation occurred after 2 days. When the culture temperature was lowered to 37℃, the HSB2 reactivation rate was intentionally increased compared with untreated IMR-32 cells cultured at 37℃ in culture medium containing 5mM HMBA. DNA methylation of HSV-2 latent infection IMR-32 cells cultured in the presence of HMBA and HMBA was intentionally reduced compared with untreated control. The results showed that the detection of DNA methylation and restriction enzyme (HpaII and MspI) was significantly reduced compared with untreated control. In the presence of 0.5μg/ml HSV2, IMR-32 cells were infected with HSV2. When cultured at 37℃, the reactivation rate of HSV2 was significantly decreased. 2. Analysis of the effects of HSV-2 latent infection in vitro, HMBA reactivation promotion activity, and HIFN-α,β, and γ on viral infection When the culture temperature is lowered from 40℃ to 37℃, the concentration of 5mM HMBA and IFN α,β and γ are exchanged for culture at 37℃. The results showed that 6, 5μM of hIFN-α,β and γ at 25 units/ml and 100 units/ml inhibited the promotion of HSV-2 reactivation by HMBA.