血管平滑筋細胞内カルシウム動態の画像解析(低酸素アシド-シス麻酔薬及び血管拡張物質の影響)

血管平滑肌细胞内钙动态的图像分析（缺氧酸中毒麻醉剂和血管扩张剂的影响）

• 批准号: 03670720
• 负责人: 多賀 紀一郎
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: Niigata University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1991
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1991 至 1993
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03670720/
• 关键词: 血管平滑筋; 細胞培養; 細胞内Caイオン濃度; アルギニンバゾプレッシン; KCl

平成3年度は血管平滑筋細胞培養法を確立させ、細胞内Caイオン濃度([Ca^<2+>]_i)の分布及び経時的変化に対する血管収縮薬の影響を検索した.1.クリ-ンベンチ(日立社製PCVー750AP)内にて摘出したラット胸部大動脈をコラゲナ-ゼ、エラスタ-ゼによって酵素処理し、得られた血管平滑筋細胞を培養皿内のカバ-スリップ上に置き、炭酸ガス培養器(ダバイエスペック社製BNA111)内で培養した.培養後4ー7日目に細胞が形態学的に血管平滑筋細胞であるかを倒立位相差顕微鏡(オリンパス光学社製CKー2)を用いて確認した.血管平滑筋細胞のミオシン重鎖に対する蛍光抗体を用いて蛍光顕微鏡によりその存在を確認した.2.蛍光Ca指示薬(fura2/AM、Dojin)を血管平滑筋細胞に取り込ませた後、灌流用チャンバ-に固定し対物100倍レンズで観察した.アルギニンバゾプレッシン(AVP)(10^<ー7>M)、KCl(100mM)を投与し[Ca^<2+>]_iの分布及び経時的変化について既存の顕微鏡画像処理システム(ARGUSー200/CA)を用いて解析した.[Ca^<2+>]_iは500nmにおける340nm及び380nmの励起波長に対する蛍光強度比(R_<340/380>)で表した.核(N)及び細胞質(C)におけるR_<340/380>のコントロ-ル値(B)及び最大値(Pを各々NB、NP、CB、CPと表した.AVP群では、NB0.86【plus-minus】0.04、NP3.50【plus-minus】0.37、CB0.94【plus-minus】0.07、CP2.88【plus-minus】0.37、KCl群では、NB0.84【plus-minus】0.04、NP1.01【plus-minus】0.04、CB0.99【plus-minus】0.05、CP1.21【plus-minus】0.06であった(平均値【plus-minus】標準誤差).画像解析により血管平滑筋の[Ca^<2+>〕_iは静止時でも不均一な分布を示したが、ことにAVP投与によりこの不均一分布が著明となった.AVP投与により核の[Ca^<2+>]_iの上昇も観察された.現在、核の[Ca^<2+>]_i上昇の機序について検索中である.

Establishment of vascular smooth muscle cell culture method in Heisei 3, intracellular Ca ~(2 +) concentration (Ca^<2+>]_i) distribution and time-varying effects on vasoconstriction (PCV 750AP manufactured by Hitachi) The cells were cultured in a culture dish in a carbon acid incubator (BNA111 manufactured by Hitachi). 4 - 7 days after culture, the cells were morphologically confirmed by inverted phase contrast microscope (CK 2). 2. The existence of the vascular smooth muscle cells was confirmed by the use of fluorescent antibodies in the light microscope. 2. The fluorescent Ca indicator (fura2/AM, Dojin) was used to detect the vascular smooth muscle cells. The distribution of Ca^<2+>_i and the time-dependent transformation of Ca^<2+>_i in the presence of AVP (10^<-7>M) and KCl(100mM) were analyzed using ARGUS 200/CA. [Ca The intensity ratio (R_<340/380>) between excitation wavelengths of 340nm and 380nm at 500nm is expressed. Nuclear (N) and cytoplasmic (C) values (R_<340/380>) and maximum values (B)(P NB, NP, CB, CP.AVP, NB0.86 [plus-minus] 0.04, NP3.50 [plus-minus] 0.37, CB0.94 [plus-minus] 0.07, CP2.88 [plus-minus] 0.37, KCl, NB0.84 [plus-minus] 0.04, NP1.01 [plus-minus] 0.04, KCl CB0.99 [plus-minus] 0.05, CP1.21 [plus-minus] 0.06 (Mean value [plus-minus] standard error). When the [Ca^<2+>]_i is stationary, the uneven distribution of the [Ca ^<2+>]_i is obvious. Now, nuclear [Ca^<2+>]_i rise in the mechanism of the search.

项目成果

Hideyoshi Fujihara: "Argーvasopressin increases nuclear[Ca^<2+>] in single cultured vascular smooth mascle cells of rat aorta." Jap.J.pharmacol.58. (1992)

Hideyoshi Fujihara：“Argー加压素增加大鼠主动脉单个培养血管平滑肌细胞的核 [Ca^<2+>]”（Jap.J.pharmacol.58）。

冨士原 秀善: "蛍光カルシウム指質薬furaー2を用いた血管平滑筋細胞内Ca^<2+>の画像解析" 麻酔. 41. 270-273 (1992)

Hideyoshi Fujihara：“使用荧光钙指示剂fura-2对血管平滑肌细胞中的细胞内Ca^2+进行图像分析”麻醉41。270-273(1992)。