ウニ卵イノシト-ル三りん酸受容体の精製とそのカルシウムチャネルとしての性質

海胆卵肌醇三磷酸受体的纯化及其钙通道特性

• 批准号: 03640601
• 负责人: 黒田 英世
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: University of Toyama
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1991
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1991 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03640601/
• 关键词: カルシウムイオン; イノシト-ル三りん酸; 小胞体; 受容体; ウニ; 受精

各種動物卵に於いて受精初期に細胞内カルシウムイオン濃度([Ca^<2+>]_1)が一過性に増大する。これには小胞体膜に存在すると考えられているイノシト-ル三燐酸(IP_3)受容体が関与していると考えられている。しかしこの受容体の性質は良く分かっていない。そこで本研究の目的は以下の三点である。1.ウニ未受精卵より小胞体に由来すると考えられる膜画分を得、それよりのカルシウム遊離の基本的性質を明らかにする。2.その膜画分よりIP_3受容体を分離精製しその性質を明らかにする。3.さらに精製した受容体を燐脂質と混合し、プロテオリポソ-ムに再構成しカルシウムチャネルとしての性質を有するかどうかを調べる。研究の結果以下の事が判明した。(1)ウニ未受精卵より常法に従ってミクロソ-ム分画を調製すると、それはIP_3添加によりカルシウムを遊離する。この反応はヘパリンにより阻害される。(2)カフェインによっても遊離が起こるが、これは(1)とは独立した遊離機構で「カルシウムによるカルシウム遊離」だと考えられる。(3)ミクロソ-ム分画をTriton Xー100で可溶化しDEAEーCellulose,HeparinーAgarose,ConAーSepharose及びIP_3ーSepharoseを用い分離精製したところIP_3との結合能が1000倍以上に濃縮された。その最終的な分画をSDSーPAGEで観察したところ分子量214及び209kDのタンパク質が検出された。この二つの成分の関係は未だ明かではない。(4)この二種類のタンパン質は、ラット小脳のイノシト-ル三燐酸受容体に対する抗体(御小柴研より分与される)とは交叉しない。(5)以上のごとくIP_3にたいし結合能のあるタンパク質が相当濃縮された。しかし最初のミクロソ-ム分画に於けるこの成分はネズミの小脳などに比べると一千分の一以下と非常に少ない。それ故現在のところ再構成実験を行うには試料が少ない。現在方法の改良につとめると共に、試料を蓄積している。

The intracellular concentration of [Ca^<2+>]_1 increased transiently during the early stage of fertilization. A study of the existence of a small cell membrane in the form of a triphosphate (IP_3) receptor The nature of the receptor is not good. The purpose of this study is to explore the following three aspects. 1. The origin of the unfertilized ovum and the basic properties of its free membrane are discussed. 2. The separation and purification of IP_3 receptor by membrane technology 3. Refine the receptor, mix it with phospholipids, reconstitute it, and adjust its properties. The results of the study are as follows: (1)The unfertilized eggs are usually prepared by adding IP_3 to the mixture. This is the first time I've ever seen a woman. (2)The following is an example of how to create a "free" organization. (3)Triton X-100 solubilizes DEAE-Cellulose,Heparin-Agarose,ConA-Sepharose and IP_3-Sepharose, which are separated and purified by using Triton X-100 and concentrated by more than 1000 times. The final analysis was performed by SDS PAGE. The molecular weight of the sample was 214 kD and 209kD. The relationship between the two components is not clear. (4)These two types of antibodies are cross-linked with each other. (5)The above IP_3 binding energy is quite concentrated. In the first place, the composition of the film is very small. Therefore, there are very few samples to be tested when the current Now the method is improved, and the sample is accumulated.

项目成果

R.Kuroda,H.Kuroda,T.Murai and Y.Imae: "Purification of the inositol 1,4,5ーtriphosphate receptor from sea urchin eggs." Developmental Biology.

R.Kuroda、H.Kuroda、T.Murai 和 Y.Imae：“从海胆卵中纯化肌醇 1,4,5-三磷酸受体”。