ヒト卵管上皮における線毛発生と性ステロイド受容体発現について

人输卵管上皮的纤毛发育和性类固醇受体表达

• 批准号: 05857001
• 负责人: 萩原 治夫
• 金额: $ 0.51万
• 依托单位: Gunma University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05857001/
• 关键词: 卵管; 線毛発生; エストロゲン受容体; プロゲステロン受容体; 免疫細胞化学; 超微形態

研究材料として、手術により摘出されたヒト卵管膨大部粘膜を用いた。1、採取した卵管の新鮮凍結組織、及びPLP固定液にて6時間固定し水洗後凍結した組織から、クリオスタットにて6mumの切片を作成した。抗エストロゲン受容体(ER)抗体、抗プロゲステロン受容体(PR)抗体(Immunotech)を用いて、ER、PRの局在部位をABC法(DAKO,LSAB kit)及び蛍光抗体法(Amersham,fluorescein-linked)にて可視化し、光学顕微鏡を用いて観察した。抗体希釈に感動ミキサ-(ボルテックス)を用いた。2.卵管粘膜を細切し、3% PA(+0.2% GA)又はPLP固定液中にて、35℃以下60秒マイクロウェーブ照射し(MFW-2,日新EM),同液で4℃2時間固定した。水洗後、2% uranylacetate にて4℃ 1時間染色、エタノールにて脱水、LR Whiteに包埋し、50℃にて重合、或いは脱水後、Lowicryl K4Mに包埋し、堂阪イ-エム、TUV-200にて紫外線重合した。超薄切片を作製し、抗ER抗体、抗PR抗体を反応させ、金コロイド標識2次抗体(Amersham,10nm colloidal gold-labeled)を用いて、ERとPRの細胞質内及び核内の局在について透過型電子顕微鏡により観察した。3、卵胞期、黄体期、月経期の線毛細胞、分泌細胞、線毛発生を示す細胞について、核内に認められるER、PRの金粒子の標識数を数え、核の単位面積当たりのERとPRを算出した。線毛細胞と分泌細胞におけるER、PRの発現の月経周期性変動及び線毛形成を示す細胞への分化に伴うER、PR発現の変動の有意性についてNEC PC-9801BX/U2を本体とするパーソナルコンピューターを用いて、統計学的に検討した。

Research materials: と と て, surgery: によ, use of と to remove the mucosa of the enlarged part of the oocyte tubule: を. Tube 1, take し た eggs の fresh frozen tissue, and び PLP fixatives に て six time fixed し washed after freeze し た organization か ら, ク リ オ ス タ ッ ト に て 6 mum の slice を made し た. Resistance エ ス ト ロ ゲ ン let body (ER) antibody, anti プ ロ ゲ ス テ ロ ン by let body (PR) antibody (Immunotech) を い て, ER, PR の bureau in parts を ABC method (LSAB DAKO The kit) and び蛍 photoantibody method (Amersham,fluorescein-linked)にて visualization にて, and optical 顕 microscope を using て観 て観 to examine た. Antibody Heishak に moved キサ キサ-(ボ テッ テッ ス ス)を used を た た. を 2 eggs mucosa fine cut し, 3% PA (GA + 0.2%) and は PLP in fixed liquid に て, below 35 ℃, 60 seconds マ イ ク ロ ウ ェ ー し ブ irradiation (MFW - 2, the new EM), with liquid で 4 ℃ and 2 time fixed し た. After washing, 2% uranylacetate に て 4 ℃ 1 time dyeing, エ タ ノ ー ル に て dehydration, LR White に embedding し, 50 ℃ に て overlap, or い は after dehydration, Lowicryl K4M に embedding し, hall e. イ - エ ム, TUV - 200 に て ultraviolet overlap し た. し the ultrathin slices を cropping, ER, PR を antibodies against 応 さ せ, gold コ ロ イ ド identify two antibodies (Amersham, 10 nm colloidal gold labeled) を with い て, ER と PR within the cytoplasm and び の の bureau in に つ い て type through electronic 顕 micromirror に よ り 観 examine し た. Stage 3, follicle and corpus luteum, month 経 phase lines to の hair cells, secretory cells, MAO 発 raw を す cells に つ い て, nuclear に recognize め ら れ る ER, PR の の gold particles identification number を え, nuclear の 単 an area when た り の ER と PR を calculate し た. Line of hair cells secretory cells と に お け る ER, PR の 発 経 の month now - the periodical and び line formed MAO を す cells へ の differentiation に う ER, PR 発 is の - move の is interested in sex に つ い て NEC PC - 9801 bx/U2 を ontology と す る パ ー ソ ナ ル コ ン ピ ュ ー タ ー を with い て, statistics of に beg し 検 た.