高分子量型塩基性線維芽細胞増殖因子(bFGF)の腫瘍細胞核内での機能

高分子量碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）在肿瘤细胞核中的作用

• 批准号: 05152122
• 负责人: 西川 克三
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Kanazawa Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Cancer Research
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05152122/
• 关键词: bFGF; 細胞核; 転写; 固形腫瘍; 向核シグナル; マイクロインジェクション; リコンビナント; 単クローン抗体

1.ヒト高分子量型bFGF(24kDa-bFGF)遺伝子のN末端領域に対応する部位はGC含量が高く、大腸菌で発現し難いので、コドンバイアスに合わせてできるだけATに置換した224bpのDNA断片を合成した。この断片で置換したDNAを大腸菌に導入したところ24kDa-bFGFの良好な発現が見られた。大腸菌抽出液から同蛋白質を精製した。一方、リコンビナント18kDa-bFGFも同様に大腸菌で発現させて精製した。2.精製した24kDa-bFGFは3T3細胞のレセプターへの結合、DNA合成の促進および培養毛細血管内皮細胞の増殖促進活性などをもっていたが、18kDa-bFGFに比べて比活性は幾分低かった。この比活性の低さはレセプターへの親和性が24kDa-bFGFの方が低いという結果と対応していた。3.bFGFを産生していないBALB/c3T3細胞の細胞質部位に24kDa-bFGFをマイクロインジェクトしたところ、2時間以内に核移行することが免疫蛍光染色法によって観察された。この核移行は選択的移行を疎害する小麦胚レクチン(WGA)によって抑制された。18kDa-bFGFも同様の実験において核移行したが、WGAの疎害効果は弱く非選択的な核膜透過によるものと思われた。4.24kDa-bFGFが核に局在しているA431細胞の核にbFGFの中和単クローン抗体をマイクロインジェクトして、その後のDNA合成を観察したところ抑制する傾向が見られた。また、無細胞転写系におけるホスホグリセリン酸キナーゼ2遺伝子の転写促進は18kDa-bFGFと同様に24kDa-bFGFでも見られたが、高濃度では抑制する傾向にあった。これらの実験については現在も検討中である。

1. ヒ ト type high molecular weight bFGF (24 kda - bFGF) heritage 伝 son の N terminal areas に 応 seaborne す る parts は が く high GC content and coliform で 発 し now difficult い の で, コ ド ン バ イ ア ス に close わ せ て で き る だ け AT に replacement し た 224 bp DNA fragment の を synthetic し た. こ の で fragment displacement し た DNA を coliform に import し た と こ ろ 24 kda - bFGF の good な 発 が now see ら れ た. Coliform extract ら and protein を refinement た た. One party, リコ ビナ ビナ ト18kDa-bFGF the same に escherichia coli で present させて refined た. 2. The refined し た 24 kda - bFGF は 3 t3 cell の レ セ プ タ ー へ の combination, DNA synthesis の promote お よ び cultivate capillary endothelial cells to promote active な の raised colonization ど を も っ て い た が, 18 kda - bFGF に than べ て is lower than active は somewhat か っ た. こ の is lower than active の さ は レ セ プ タ ー へ の affinity が 24 kda - bFGF の party が low い と い う results と 応 seaborne し て い た. 3. BFGF を produce し て い な い の BALB/c3T3 cell cytoplasm area 24 kda に - bFGF を マ イ ク ロ イ ン ジ ェ ク ト し た と こ ろ, 2 time に nuclear migration within す る こ と が immune 蛍 light staining に よ っ て 観 examine さ れ た. <s:1> nuclear transition <s:1> selection 択 the transition を疎 is harmful to する wheat germ レ チ チ によって (WGA)によって inhibition された. With others in 18 kda - bFGF も の be 験 に お い て nuclear migration し た が, WGA の 疎 harm unseen fruit は weak く non sentaku な nuclear membrane through に よ る も の と think わ れ た. 4.24 kDa - bFGF が nuclear に bureau in し て い る A431 cells の nuclear に bFGF の neutralization 単 ク ロ ー ン antibody を マ イ ク ロ イ ン ジ ェ ク ト し て, そ の の DNA synthesis after を 観 examine し た と こ ろ inhibit す る tendency が see ら れ た. ま た, no cell planning write に お け る ホ ス ホ グ リ セ リ ン acid キ ナ ー ゼ 2 heritage 伝 son の planning write promote は 18 kda - bFGF と with others in 24 kda に - bFGF で も see ら れ た が, high concentration で は inhibit す る tendency に あ っ た. Youdaoplaceholder2 れら <s:1> experience に に に て て て is currently in 検 検 discussion である.

项目成果

Nishiyama,S.: "The silencer of mouse Pgk-2 consists of two discrete DNA elements that individually have no effect" Gene. (in press). (1994)

Nishiyama,S.：“小鼠 Pgk-2 的沉默子由两个独立的 DNA 元件组成，它们单独不起作用”基因。

Kanda,S.: "Peritubular endothelial cell proliferation in mice during compensatory renal growth after unilateral nephrectomy" Am.J.Physiol.265. F712-F716 (1993)

Kanda,S.：“单侧肾切除术后代偿性肾脏生长期间小鼠管周内皮细胞增殖”Am.J.Physiol.265。