複数実験系を用いたマウス胚の変異原物質感受性の比較検討

多个实验系统对小鼠胚胎诱变剂敏感性的比较研究

• 批准号: 05770247
• 负责人: 三瀬 敬治
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Sapporo Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05770247/
• 关键词: 姉妹染色分体交換; マウス; 胚; マイトマイシンC; in vitro

本実験においてマウス胚細胞は交尾後6.5日から8.5日までの物を用いた。in vitro実験系では、頚椎脱臼法により屠殺した実験動物を、実体顕微鏡下で無菌的に胚細胞を取り出し培養を行った。培養液はEagleのMEMに10%の牛胎児血清と、5mug/mlの5-Bromo-2′-deoxy-uridineを加えたものを用いた。胚細胞をマイトマイシンC(MMC)投与群と非投与群の2群に分け、投与群には100ng/mlのMMCを加える。両群を24時間光を遮断したCO_2インキュベータで培養後、低張処理を行い、1:3の酢酸とメタノールの混合液で固定した。固定した胚は染色体標本とするまで-20℃の冷凍庫で保存する。染色体標本は胚を70%酢酸で1〜2分処理した後、酢酸とメタノールの混合液に戻し、空気乾燥法で作成した。観察された姉妹染色分体交換(SCE)はコンピュータで統計学的に処理した。in vitro実験系では100ng/mlのMMCにより誘発されたSCE頻度は6.5日、7.5日、8.5日胚においてそれぞれ、1細胞当たり28.5±4.2、37.1±4.5、35.1±4.6であった。この実験結果と我々がこれまで得たin vitro実験系と比較すると、以下のことが示唆される。1.in vitro実験系において、MMCにより誘発されるSCE頻度はin utero実験系の約50倍である。2.このMMCを用いた二つの実験系では、共に6.5日胚より7.5及び8.5日胚で統計学的に有意に多くのSCE誘発が観察された。しかしながら二つの実験系には、変異原物質投与後の処理時間の差、またその間に進む胚の発生および分化の違いがあり、両者を比較するには慎重な検討が必要である。今後もさらなるデータの蓄積、研究を進める必要性がある。

The embryo cells are 6.5 days after mating and 8.5 days after mating. In vitro, the method of dislocation of the vertebral body is used to kill and culture the embryo cells in vitro. The culture medium was prepared by adding 10% fetal bovine serum and 5 ug/ml 5-Bromo-2′-deoxyuridine to Eagle MEM. Embryonic cells are divided into two groups: administration and non-administration, and administration of MMC at 100ng/ml. After incubation, hypotonic treatment and fixation with 1:3 mixture of acetic acid and acetic acid were carried out. The fixed embryos are stored in a freezer at-20℃ without chromosome loss. The chromosome was prepared by 70% acetic acid treatment for 1 ~ 2 minutes, acetic acid treatment for 1 ~ 2 minutes, and air drying method. To observe the chromatid exchange (SCE), the statistical analysis was carried out. In vitro, the frequency of SCE induced by MMC at 100ng/ml was 6.5, 7.5, 8.5 days, 1 cell was 28.5±4.2, 37.1±4.5, 35.1±4.6 days. The result of this is that we can get the result in vitro. 1.in vitro systems are about 50 times more frequent than MMC systems. 2. This MMC was used in the second half of the study, and the results showed that there were 6.5 days, 7.5 days and 8.5 days in total, and the statistical results showed that there were more than one SCE induction. The difference in processing time after the introduction of different substances, the difference in the development and differentiation of embryos, and the comparison between them are necessary for careful examination. In the future, it is necessary to accumulate and study.